Avaliação da autofagia como mecanismo limitante da eficiência terapêutica de inibidores farmacológicos de FLT3 em leucemia mieloide aguda (2023)
- Authors:
- Autor USP: MELO, MANUELA ALBUQUERQUE DE - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RIO
- DOI: 10.11606/D.17.2023.tde-05012024-142422
- Subjects: INIBIDORES DE ENZIMAS; LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA; MUTAÇÃO GENÉTICA; PROLIFERAÇÃO CELULAR
- Keywords: Acute myeloid leukemia; Autofagia; Autophagy; FLT3 inhibitor; Inibidor de FLT3; Leucemia mieloide aguda
- Agências de fomento:
- Language: Português
- Abstract: Mutações no gene FLT3 atingem cerca de 30% dos pacientes com leucemia mieloide aguda (LMA), sendo a FLT3-ITD a mais frequente e relacionada a um pior prognóstico. O desenvolvimento de inibidores de FLT3 representou um avanço no tratamento da LMA, pois reduzem a proliferação celular e melhoram a sobrevida dos pacientes. Contudo, a limitação clínica no tratamento da LMA com mutação FLT3 representa uma oportunidade de investigar combinações de fármacos que resultem em melhores resultados terapêuticos. O presente estudo, portanto, tem como objetivo investigar se inibidores de FLT3 induzem autofagia e se a terapia combinada com inibidores da autofagia potencializam o efeito anti-leucêmico dos inibidores de FLT3. Para tanto, investigamos, por meio de análise de dados públicos de expressão gênica, e análises de enriquecimento de conjuntos gênicos (GSEA), os efeitos do tratamento ex vivo com midostaurin e quizartinib em células primárias de pacientes com LMA. Para avaliar autofagia decorrente do tratamento com inibidores de FLT3, as linhagens celulares com mutação FLT3-ITD MOLM13 (homozigose) e MV4-11 (heterozigose) foram tratadas in vitro por 48 horas com inibidor de FLT3 de primeira ou segunda geração (midostaurin, na dose de 12.5 nM e quizartinib na dose de 1.25 nM, respectivamente); a autofagia foi visualizada através de microscopia óptica (coloração panótica), microscopia de fluorescência e citometria de fluxo (ambas pela detecção da sonda celular de livre-permeabilização laranja de acridina) e os mecanismos moleculares da indução da autofagia foi realizada por meio da análise de expressão proteica por Western Blotting. Para avaliar os efeitos anti-leucêmicos decorrente do tratamento com fármacos inibidores de FLT3 e de autofagia, as linhagens celulares e as células primárias foram tratadas por 48 horas com midostaurin na dose de 12.5 nM e quizartinib nadose de 1.25 nM combinados ou não com a inibição farmacológica (cloroquina na dose de 5 µM) ou genética (silenciamento gênico de ATG5 através de partículas lentivirais) da autofagia e a sobrevida celular foi avaliada a partir de ensaios de viabilidade (metiltiazoltetrazólio), proliferação (anti-Ki-67 humano) e morte celular (Anexina V). Para comparação entre variáveis contínuas em grupos categóricos foi utilizado o teste ANOVA e o pós-teste de Bonferroni. Observamos o enriquecimento de genes da autofagia em pacientes com LMA e mutação em FLT3 que responderam mal ao tratamento ex vivo com midostaurin e quizartinib (p<0,05). Em linhagens celulares de LMA com mutação FLT3 (MOLM13 e MV4-11), o tratamento in vitro com inibidores de FLT3 aumentou a vacuolização citoplasmática e a formação de autofagolisossomos (p<0,05). A análise de expressão proteica permitiu observar que o tratamento com midostaurin e quizartinib induziu autofagia a partir da degradação da proteína p62 e da conversão da proteína LC3B-I em LC3B-II com posterior degradação de LC3B-II, e a indução da autofagia foi mediada por meio da inibição da via de sinalização PI3K-AKT-mTOR. A combinação de inibidor de FLT3 com a inibição genética ou farmacológica da autofagia potencializou o efeito antineoplásico dos inibidores de FLT3 demonstrado por meio da redução da viabilidade celular (p<0,05) e do aumento da apoptose celular (p<0,05) comparado com a monoterapia com inibidores de FLT3. Contudo, a inibição da autofagia não demonstrou alterar a capacidade de proliferação celular (p>0,05). O tratamento combinado de midostaurin ou quizartinib com a cloroquina reduziu a viabilidade e aumentou a apoptose em células de paciente com LMA com mutação FLT3-ITD, mas não em paciente com LMA com FLT3-WT. Em conclusão, em células de LMA com mutação FLT3, os inibidores de FLT3 de primeira ousegunda geração induzem autofagia, a autofagia representa um alvo terapêutico, e a inibição da autofagia pode, portanto, aumentar o efeito anti-leucêmico de inibidores de FLT3
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- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2023
- Data da defesa: 28.09.2023
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- Cor do Acesso Aberto: gold
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ABNT
MELO, Manuela Albuquerque de. Avaliação da autofagia como mecanismo limitante da eficiência terapêutica de inibidores farmacológicos de FLT3 em leucemia mieloide aguda. 2023. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2023. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17154/tde-05012024-142422/. Acesso em: 20 maio 2024. -
APA
Melo, M. A. de. (2023). Avaliação da autofagia como mecanismo limitante da eficiência terapêutica de inibidores farmacológicos de FLT3 em leucemia mieloide aguda (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17154/tde-05012024-142422/ -
NLM
Melo MA de. Avaliação da autofagia como mecanismo limitante da eficiência terapêutica de inibidores farmacológicos de FLT3 em leucemia mieloide aguda [Internet]. 2023 ;[citado 2024 maio 20 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17154/tde-05012024-142422/ -
Vancouver
Melo MA de. Avaliação da autofagia como mecanismo limitante da eficiência terapêutica de inibidores farmacológicos de FLT3 em leucemia mieloide aguda [Internet]. 2023 ;[citado 2024 maio 20 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17154/tde-05012024-142422/
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.17.2023.tde-05012024-142422 (Fonte: oaDOI API)
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