Estrutura, expressão e análise funcional do gene codificando calmodulina no fungo aquático Blastocladiella emersonii (2000)
- Autores:
- Autor USP: SIMÃO, RITA DE CÁSSIA GARCIA - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QBQ
- Assunto: BIOLOGIA MOLECULAR
- Idioma: Português
- Resumo: O único gene para Calmodulina (CaM) e o CDNA correspondente do quitridiomiceto Blastociadiella emersoníi foram isolados e caracterizados. O gene CaM é interrompido por três introns e transcrito como uma única espécie de mRNA de 0,7 kb, codificando uma proteína 91% idêntica à CaM humana. A Calmodulina de B. emersoníí foi expressa em Escherichía colí como uma proteínade fusão com Glutationa-S-transferase (GST), purificada por cromatografia de afinidade e crivada da porção GSTusando uma protease sítio específico. Na presença de Ca2+ a CaM de 8. emersoníí exibiu uma alteração na mobilidade eletroforética semelhante à CaM bovina e foi capaz de ativar a autofosforilação da proteína quinase dependente de Ca+2- CaM (CAMKII) de cérebro de rato. A expressão da Calmodulina é regulada durante o desenvolvimento em B.emersonii, o mRNA da CaM e a concentração da proteína aumentam durante a esporulação atingindo um nível máximo antes da liberação dos zoósporos no meio, no final deste estágio. Os níveis da proteína e do mRNA decrescem drasticamente no estágio de zoósporo aumentando novamente durante a germinação. Os antagonistas de CaM, composto 48/80, calmidazolium e W7 inibiram completamente a esporulação de B. emersoníi quando adicionados às culturas pelo menos 120, 150 e 180 min após a indução, respectivamente. Todas estas drogas também inibiram o crescimento e a produção de zoósporos neste fungo. O bloqueador de canais de Ca2+ , TMB-8, e o inibidor de CaMKII KN93 inibiramcompletamente a esporulação quando adicionados até 60 minutos após a indução deste estágio, porém apenas KN93 afetou o crescimento do fungo. Os dados apresentados sugerem que o complexo Ca2+ -CaM e a CaMKII têm um papelimportante durante o crescimento e esporulação em B. emersoníi
- Imprenta:
- Data da defesa: 30.08.2000
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ABNT
SIMÃO, Rita de Cássia Garcia. Estrutura, expressão e análise funcional do gene codificando calmodulina no fungo aquático Blastocladiella emersonii. 2000. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2000. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-05072019-182508/. Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Simão, R. de C. G. (2000). Estrutura, expressão e análise funcional do gene codificando calmodulina no fungo aquático Blastocladiella emersonii (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-05072019-182508/ -
NLM
Simão R de CG. Estrutura, expressão e análise funcional do gene codificando calmodulina no fungo aquático Blastocladiella emersonii [Internet]. 2000 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-05072019-182508/ -
Vancouver
Simão R de CG. Estrutura, expressão e análise funcional do gene codificando calmodulina no fungo aquático Blastocladiella emersonii [Internet]. 2000 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-05072019-182508/
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