Caracterização da localização subcelular da proteina THI1 de Arabidopsis thaliana (2002)
- Autores:
- Autor USP: CHABREGAS, SABRINA MOUTINHO - ESALQ
- Unidade: ESALQ
- Sigla do Departamento: LGN
- Assuntos: CÉLULAS CLONAIS; EXPRESSÃO GÊNICA; GENES; PROTEÍNAS DE PLANTAS
- Idioma: Português
- Resumo: O produto do gene thi1 de Arabidopsis thaliana está provavelmente envolvido na biossíntese de tiamina (vitamina B1) e na proteção do DNA organelar contra danos. Estudos sobre a biossíntese da tiamina em plantas sugerem uma localização plastidial para este mecanismo, o que está de acordo com a existência de um peptídeo de trânsito cloroplástico (TP) na região N-terminal de THI1. Por outro lado, em leveduras a tiamina é sintetizada em mitocôndrias. Interessantemente, o cDNA de thi1 de A. thaliana complementa uma cepa de levedura com disrupção no gene homólogo thi4. A análise da seqüência de aminoácidos de THI1 revelou a presença de uma região capaz de formar uma estrutura do tipo a-hélice anfifílica, freqüentemente encontrada em preseqüências mitocondriais, localizada logo após o peptídeo de trânsito cloroplástico. O papel desta região na localização da proteína THI1 nas mitocôndrias foi comprovado a partir de ensaios envolvendo construções de genes quiméricos (contendo ou não a putativa seqüência de direcionamento mitocondrial) e um gene repórter (uidA). Estas construções foram introduzidas em plantas de tabaco e a localização da atividade GUS foi determinada nas frações subcelulares das plantas transgênicas. Análise direta da presença de THI1 nas mitocôndrias e cloroplastos de Arabidopsis foi realizada via imunolocalização. Também foram fornecidas evidências que as duas isoformas organelares são codificadas por um único transcrito nuclear. Experimentos detranscrição/tradução 'in vitro' indicaram a ocorrência de dois produtos da tradução a partir de códons de iníciação em fase de leitura. Mutações sítio-específicas na seqüência de thi1 acoplados à experimentos usando a proteína fluorescente verde (GFP) mostraram que a tradução no primeiro AUG determina a localização da proteína nos cloroplastos, enquanto que a tradução no segundo AUG é responsável pelo endereçamento da proteína às mitocôndrias. ) A análise do contexto para início da tradução revelou que a região em torno do primeiro AUG é mais favorável para a tradução do mRNA de thi1. Além disso, observou-se a presença de uma forte estrutura em "grampo de cabelo" próximo ao segundo códon AUG, indicando um contexto subótimo capaz de interferir na tradução. Estas observações confirmaram os dados obtidos a partir da tradução 'in vitro' na qual a iniciação se dá preferencialmente no primeiro AUG o que pode sugerir uma maior necessidade da proteína nos plastídeos
- Imprenta:
- Local: Piracicaba
- Data de publicação: 2002
- Data da defesa: 08.02.2002
-
ABNT
CHABREGAS, Sabrina Moutinho. Caracterização da localização subcelular da proteina THI1 de Arabidopsis thaliana. 2002. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Piracicaba, 2002. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-26082002-142944/. Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Chabregas, S. M. (2002). Caracterização da localização subcelular da proteina THI1 de Arabidopsis thaliana (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Piracicaba. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-26082002-142944/ -
NLM
Chabregas SM. Caracterização da localização subcelular da proteina THI1 de Arabidopsis thaliana [Internet]. 2002 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-26082002-142944/ -
Vancouver
Chabregas SM. Caracterização da localização subcelular da proteina THI1 de Arabidopsis thaliana [Internet]. 2002 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-26082002-142944/
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