Estudos da estabilidade conformacional da tropomiosina e de suas interações com outras proteínas do filamento fino (2003)
- Authors:
- Autor USP: HOLTHAUZEN, LUIS MARCELO FERNANDES - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QBQ
- Subjects: PROTEÍNAS MUSCULARES (ESTUDO); MIOSINA (ESTUDO); BIOFÍSICA
- Language: Português
- Abstract: Uma série de mutantes recombinantes da tropomiosina com a sonda fluorescente 5-hidroxitriptofano inserida em várias posições ao longo da seqüência primária vêm sendo utilizados em nosso laboratório para o estudo em nível molecular do controle do processo de contração muscular. Estes mutantes têm sido produzidos em cepas de bactéria auxotróficas para triptofano em meio mínimo ao qual adicionamos 5-hidroxitriptofano, um análogo do aminoácido triptofano. Esta sonda fluorescente apresenta a vantagem de absorver energia numa faixa de comprimentos de onda não absorvida pelo triptofano (temos usado com sucesso o comprimento de onda de 312 'NANO METROS' para excitar seletivamente o 5-hidroxitriptofano). Desta forma, o ambiente da sonda pode ser estudado em situações nas quais outras proteínas que possuam triptofanos, como, por exemplo a actina, estejam presentes. Procedemos a uma caracterização dos mutantes utilizados quanto à sua ligação à actina na ausência e presença de troponina ('MAIS'/'MENOS' 'Ca POT.2 ''Mais') e na presença de acrilamida por meio de ensaios de co-sedimentação com actina. O comportamento funcional dos diversos mutantes foi investigado pela análise da regulação da atividade 'Mg POT.2''MAIS'-ATPásica da acto-S1 miosina destes mutantes na ausência e na presença de troponina ('MAIS'/'MENOS' 'Ca POT.2''MAIS'). Estudos da estabilidade destes mutantes da tropomiosina por meio de desnaturação por temperatura seguida por dicroísmo circular foram realizadospara analisarmos o efeito das mutações na estabilidade global da molécula. Ensaios de desnaturação por uréia seguidas por fluorescência também foram realizados para analisarmos a estabilidade da molécula próxima à região da sonda fluorescente. O presente estudo compreendeu ainda a análise da supressão de fluorescência pelos supressores extrínsecos acrilamida e iodeto para diversos mutantes da tropomiosina na presença e ausência de outras proteínas do ) filmento fino, o que permitiu a obtenção de informações sobre o grau de exposição da sonda fluorescente nas diversas situações estudadas bem como sobre o ambiente eletrostático ao redor das sondas nestas diferentes situações. Estes resultados permitiram a obtenção de um modelo para a ligação da tropomiosina ao filamento de actina na presença de troponina ('MAIS'/'MENOS' 'Ca POT.2''MAIS'). Este modelo propõe que as bandas a do padrão de repetição 'ALFA'/ 'BETA' inicialmente proposto por McLachlan e Stewart (1975 e 1976) se liguem ao filamento na ausência de íons cálcio. A introdução de cálcio no sistema é capaz de induzir uma rotação e um deslocamento na molécula de tropomiosina com relação ao filamento de actina. Nesta situação, seriam as bandas 'BETA' da tropomiosina as responsáveis pela ligação desta molécula ao filamento de actina
- Imprenta:
- Data da defesa: 29.09.2003
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ABNT
HOLTHAUZEN, Luis Marcelo Fernandes. Estudos da estabilidade conformacional da tropomiosina e de suas interações com outras proteínas do filamento fino. 2003. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2003. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-23042018-121308/. Acesso em: 23 abr. 2024. -
APA
Holthauzen, L. M. F. (2003). Estudos da estabilidade conformacional da tropomiosina e de suas interações com outras proteínas do filamento fino (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-23042018-121308/ -
NLM
Holthauzen LMF. Estudos da estabilidade conformacional da tropomiosina e de suas interações com outras proteínas do filamento fino [Internet]. 2003 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-23042018-121308/ -
Vancouver
Holthauzen LMF. Estudos da estabilidade conformacional da tropomiosina e de suas interações com outras proteínas do filamento fino [Internet]. 2003 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-23042018-121308/
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