Clonagem em bovinos: uso de fibroblastos fetal e adulto como fonte doadora de núcleo (2003)
- Autores:
- Autor USP: MELLO, MARCO ROBERTO BOURG DE - FMVZ
- Unidade: FMVZ
- Sigla do Departamento: VRA
- Assuntos: EMBRIÃO DE ANIMAL; CLONAGEM ANIMAL; NÚCLEO CELULAR (TRANSFERÊNCIA); FIBRIBLASTOS; BOVINOS
- Idioma: Português
- Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a viabilidade in vitro e in vivo de embriões bovinos reconstruídos com oócitos enucleados em Metáfase II e núcleos de células somáticas (fibroblastos) fetais e adultas. Para tanto, oócitos de ovários colhidos em matadouro foram maturados in vitro por 17 horas e enucleados pela remoção do primeiro corpúsculo polar (CP) e da região do oolema contendo a placa metafásica. Como núcleo doador, foram utilizados fibroblastos de orelha de vaca da raça Nelore e de feto colhido em abatedouro. Para a reconstrução dos embriões, cada célula doadora de núcleo, após indução à G0, foi inserida sob a zona pelúcida de cada oócito enucleado e o complexo citoplasma receptor - núcleo doador (CCN) fundido e ativado por eletrofusão (2 pulsos de 4 KV/cm durante 20'mü's). Após ativação elétrica, cada CCN foi incubado em solução de ciclohexemide (10'mü'g/ml) e citocalasina D (2,5'mü'g/ml) por 1 hora e, em seguida, em solução de ciclohexemide (10'mü'g/ml) por mais 4 horas. Os embriões reconstruídos e ativados, assim como os fecundados in vitro (controle), foram co-cultivados em monocamada de células da granulosa e TCM 199 acrescido de 10% de SFB por 7-9 dias. Após o co-cultivo por 7-9 dias, parte dos embriões (controle e reconstruídos) foi fixada e corada para determinação do número de células e parte transferida para receptoras. Um total de 668 embriões foram reconstruídos com célula fetal e 569 com fibroblasto adulto. Após eletrofusão, 212 embriõesreconstruídos com célula fetal e 181 com célula adulta fundiram e 32 (15,1%) e 30 (16,6%) atingiram o estádio de blastocisto, respectivamente. O número médio de células dos blastocistos foi 129,3, 101,3 e 114,3, respectivamente, para célula fetal, adulta e embriões FIV (controle), não havendo diferença estatística significante entre os grupos (P<0,05). (continua) ) Após a transferência de 18 blastocistos de célula fetal e 21 de célula adulta, as taxas de prenhez aos 90 dias foram 16,7% (3) e 19% (4), respectivamente, não havendo diferença estatística significante entre os grupos (P<0,05). A primeira prenhez com célula fetal deu origem a um bezerro saudável, aos 290 dias, pesando 34kg. Uma das receptoras morreu aos 229 dias de gestação em conseqüência de hidroalantóide e outra abortou aos 252 dias. As prenhezes de embriões reconstruídos com célula adulta ainda estão em andamento. Estes resultados indicam que fibroblastos fetal e adulto podem ser usados como doadores de núcleo com semelhantes taxas de desenvolvimento in vitro e in vivo
- Imprenta:
- Data da defesa: 18.12.2003
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ABNT
MELLO, Marco Roberto Bourg de. Clonagem em bovinos: uso de fibroblastos fetal e adulto como fonte doadora de núcleo. 2003. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2003. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-29062005-161626/. Acesso em: 23 abr. 2024. -
APA
Mello, M. R. B. de. (2003). Clonagem em bovinos: uso de fibroblastos fetal e adulto como fonte doadora de núcleo (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-29062005-161626/ -
NLM
Mello MRB de. Clonagem em bovinos: uso de fibroblastos fetal e adulto como fonte doadora de núcleo [Internet]. 2003 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-29062005-161626/ -
Vancouver
Mello MRB de. Clonagem em bovinos: uso de fibroblastos fetal e adulto como fonte doadora de núcleo [Internet]. 2003 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-29062005-161626/
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