Expressão da proteína L1 do capsídio de HPV-16 em leveduras metilotróficas (2007)
- Authors:
- Autor USP: BAZAN, SILVIA BOSCHI - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QBQ
- Subjects: PAPILOMA (IMUNOLOGIA); VACINAS (DESENVOLVIMENTO); BIOTECNOLOGIA (ESTUDO); PROTEÍNAS (ESTUDO); EXPRESSÃO GÊNICA
- Language: Português
- Abstract: Papilomavírus humanos (HPVs) são vírus de DNA que infectam células epiteliais, podendo ser responsáveis pelo aparecimento de lesões benignas e malignas. Dentre os mais de 120 tipos identificados, o HPV-16 constitui o principal agente etiológico do câncer cervical, que é uma das maiores causas de morte por câncer em mulheres no mundo. Sendo assim, infecções associadas ao HPV devem ser prevenidas por vacinas indutoras de resposta imune vírus-específicas. A proteína L1 do capsídio viral é capaz de arranjar-se em partículas morfologicamente e antigenicamente semelhantes ao vírus, denominadas "vírus-like particles" (VLPs), que induzem altos títulos de anticorpos neutralizantes. Neste trabalho, foram clonados os genes L1 selvagem e otimizado de HPV-16 em vetores de expressão de leveduras metilotróficas como Hansenula polymorpha e Pichia pastoris. Foi observada uma expressão consistente da proteína recombinante apenas em P. pastoris, com o gene L1 otimizado. Foram realizadas diversas tentativas de purificação da proteína heteróloga, empregando técnicas de cromatografia e ultracentrifugação em gradiente descontínuo de sacarose. A correta montagem das VLPs foi confirmada por microscopia eletrônica. Problemas de agregação, heterogeneidade e adsorção a superfícies apresentados pela proteína L1 foram resolvidos após utilização de surfactante não-iônico e de um procedimento de desmontagem e remontagem das partículas, gerando preparações mais homogêneas. Ensaios dehemaglutinação e inibição da hemaglutinação comprovaram a apresentação de epítopos conformacionais na superfície das VLPs. Este trabalho demonstrou pela primeira vez a expressão da proteína L1 de HPV-16 em P. pastoris, visando ao desenvolvimento de uma vacina profilática de baixo custo para o sistema público de saúde
- Imprenta:
- Data da defesa: 20.08.2007
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ABNT
BAZAN, Silvia Boschi. Expressão da proteína L1 do capsídio de HPV-16 em leveduras metilotróficas. 2007. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2007. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-18102007-171459/. Acesso em: 20 abr. 2024. -
APA
Bazan, S. B. (2007). Expressão da proteína L1 do capsídio de HPV-16 em leveduras metilotróficas (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-18102007-171459/ -
NLM
Bazan SB. Expressão da proteína L1 do capsídio de HPV-16 em leveduras metilotróficas [Internet]. 2007 ;[citado 2024 abr. 20 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-18102007-171459/ -
Vancouver
Bazan SB. Expressão da proteína L1 do capsídio de HPV-16 em leveduras metilotróficas [Internet]. 2007 ;[citado 2024 abr. 20 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-18102007-171459/
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