Estudos moleculares das enzimas Fosfoseril-tRNA Kinase de Trypanosoma brucei e Leishmania major e Seril-tRNA Sintetase de Trypanosoma brucei (2009)
- Authors:
- Autor USP: EVANGELISTA, JAQUELINE PESCIUTTI - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FFI
- Subjects: PROTEÍNAS; TRYPANOSOMA; ENZIMAS (ESTUDO)
- Language: Português
- Abstract: O estudo do processo de tradução no metabolismo celular atrai o interesse de vários grupos, em particular, o estudo do 21° aminoácido, a selenocisteína. A incorporação da selecisteína foi descrita em Escherichia coli e recentemente em eucariotos. O primeiro passo desta via é iniciado pela Seril- tRNA Sintetase que aminoacila o 'Ser-tRNA POT. SEC' (SelC) com uma serina. Em E. coli, o segundo passo é realizado pela Sec-sintetase (SelA) que remove o grupo hidroxil da cadeia lateral da serina, formando um intermediário aminoacrilil. Este serve como aceptor de seleno-fosfato gerando a selenocisteína. Em eucariotos, o processo análogo é realizado pela PSTK e pela SepSecS, que fosforila e seleniza respectivamente. Interessados nesta parte da via, iniciamos estudos moleculares das enzimas Fosfoseril-tRNA Kinase de Trypanosoma brucei e Leishmania major e Seril-tRNA Sintase de Trypanosoma brucei. Para o gene da enzima Fosfoseril-tRNA Kinase de T.brucei não foi possível obter um clone sem mutação. Já o gene da enzima Fosfoseril-tRNA Kinase de L. major foi clonado em vetor pET28 e a enzima foi expressa em células de E. coli porém com baixo rendimento impedindo a continuidade dos experimentos planejados. Portanto passou-se a investigar a enzima envolvida no primeiro passo da via, no caso, a) Seril-tRNA Sintase de T.brucei. Esta já se encontrava clonada e expressando em E. coli na fração solúvel. A proteína recombinante foi purificada com precipitação com 60% de sulfato deamônio e resinas de hidrofobicidade e de afinidade por níquel. Experimentos de gel negativo, DLS e fluorescência de anisotropia revelaram que, após a purificação, a enzima permanece estável e livre de agregações, possuindo um raio hidrodinâmico de 4,32nm e massa molecular de 110kDa. Acima de 150 nM de proteína, ela encontra-se inteiramente na forma dimétrica. Estabelecidos nestes parâmetros, informações sobre a ligação com o 'Ser-tRNA POT. SEC' poderão ser obtidos a partir da técnica de anisotropia de fluorescência visto que experimentos iniciais realizados com SerRS adicionando-se o 'Ser-tRA POT. SEC' mostram-se promissores
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2009
- Data da defesa: 15.07.2009
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ABNT
EVANGELISTA, Jaqueline Pesciutti. Estudos moleculares das enzimas Fosfoseril-tRNA Kinase de Trypanosoma brucei e Leishmania major e Seril-tRNA Sintetase de Trypanosoma brucei. 2009. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2009. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-24072009-112648/. Acesso em: 23 abr. 2024. -
APA
Evangelista, J. P. (2009). Estudos moleculares das enzimas Fosfoseril-tRNA Kinase de Trypanosoma brucei e Leishmania major e Seril-tRNA Sintetase de Trypanosoma brucei (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-24072009-112648/ -
NLM
Evangelista JP. Estudos moleculares das enzimas Fosfoseril-tRNA Kinase de Trypanosoma brucei e Leishmania major e Seril-tRNA Sintetase de Trypanosoma brucei [Internet]. 2009 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-24072009-112648/ -
Vancouver
Evangelista JP. Estudos moleculares das enzimas Fosfoseril-tRNA Kinase de Trypanosoma brucei e Leishmania major e Seril-tRNA Sintetase de Trypanosoma brucei [Internet]. 2009 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-24072009-112648/
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