Bases moleculares da mutação KG00562 e sua associação com letalidade (2009)
- Authors:
- Autor USP: PEREIRA, GUSTAVO BORGES - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBP
- Subjects: DROSOPHILA; LINHAGENS ANIMAIS; GENÉTICA ANIMAL
- Language: Português
- Abstract: O sítio de inserção do transposon na linhagem KG00562 foi mapeado entre os loci CG8709 e kermit. Esses genes são conservados evolutivamente, e estudos em outros organismos têm mostrado um papel importante no metabolismo de lipídios (CG8709) e no desenvolvimento (kermit). Assim, o mutante KG00562 poderia contribuir de modo importante na caracterização funcional desses novos genes em D. melanogaster. O CG8709, denominado aqui de DmLpin, expressa diferentes isoformas. Uma dessas isoformas, a DmLpinB, é expressa majoritariamente no tecido nervoso. Na linhagem KG00562, o mRNA de DmLpinB não é observado, sendo detectado um mRNA de menor tamanho que carrega seqüência do primeiro exon não traduzido de DmLpinB, compartilhado com kermit. Outra característica dessa linhagem mutante é o alto nível de letalidade. A inserção KG00562 em background selvagem apresenta um aumento no fenótipo de letalidade, o que é indicativo de um ganho de função. Através de RACE 3' clonamos o mRNA que contém o primeiro exon de DmLpinB/kermit. A análise da seqüência, em conjunto com informações do perfil de expressão deste mRNA, mostrou que ele é resultado de um splicing aberrante entre o primeiro exon de DmLpinB e o segundo exon do gene mini-white, presente na construção KG e utilizado como marcador da inserção. A maior fase de leitura do mRNA quimérico codifica a proteína White com a porção amino-terminal truncada em 74 aminoácidos. Testes de letalidade mostraram que a inserção KG00562 sobrebackground selvagem (CantonS) ou deficiente em white (W POT. 1118) resulta em altos níveis de letalidade, indicando que a mortalidade em KG00562 não está relacionada com interferência na função de White. Além disso, a redução nos índices de mortalidade foi observada em animais KG00562 sobre Def7860, que também expressam White truncada em sua prole, reforçando a interpretação de que a mortalidade em KG00562 não está relacionada com a expressão de White truncada, mas com alterações na expressão de genes flanqueadores da inserção. De acordo com esta hipótese, estudos de RT-PCR em tempo real em diferentes tecidos confirmaram a ausência de DmLpinB e mostraram a superexpressão de kermit no intestino (283%) e em túbulos de Malpighi (325%) na linhagem KG00562. A falta de DmLpinB parece não contribuir para a letalidade da linhagem KG00562 uma vez que a mortalidade é resgatada aos níveis normais em animais carregando essa inserção sobre a região de inserção (Def7860). Por outro lado, kermit está contribuindo para os altos índices de mortalidade de KG00562. Níveis significativamente aumentados desse transcrito são mantidos nos túbulos de Malpighi de animais KG00562 sobre background selvagem, onde a mortalidade é alta, enquanto são reduzidos a níveis semelhantes aos do selvagem, em animais KG00562 sobre Def7860, onde a mortalidade é resgatada a níveis normais
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2009
- Data da defesa: 23.10.2009
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ABNT
PEREIRA, Gustavo Borges. Bases moleculares da mutação KG00562 e sua associação com letalidade. 2009. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2009. . Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Pereira, G. B. (2009). Bases moleculares da mutação KG00562 e sua associação com letalidade (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Pereira GB. Bases moleculares da mutação KG00562 e sua associação com letalidade. 2009 ;[citado 2024 abr. 24 ] -
Vancouver
Pereira GB. Bases moleculares da mutação KG00562 e sua associação com letalidade. 2009 ;[citado 2024 abr. 24 ]
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