Clonagem e expressão da glucocerebrosidase humana em células de ovário da hamster chinês (CHO) (2010)
- Authors:
- Autor USP: NOVO, JULIANA BRANCO - BIOTECNOL
- Unidade: BIOTECNOL
- Subjects: LISOSSOMOS; PROTEÍNAS RECOMBINANTES; AMPLIFICAÇÃO DE GENES; GLICOPROTEÍNAS; GLICOPEPTÍDEOS; OVÁRIO; EXPRESSÃO GÊNICA
- Language: Português
- Abstract: Deficiência na enzima lisossomal glucocerebrosidase (GCR) resulta na doença de Gaucher. O tratamento atual consiste na administração da enzima exógena, produzida em células CHO. Porém, o medicamento disponível no mercado é extremamente custoso. Neste trabalho, propusemos a clonagem e a expressão da GCR humana em células CHO, visando a obtenção de um clone celular produtor para viabilizar a produção futura da enzima, a um custo menor, no Instituto Butantan. A expressão estável da GCR recombinante foi obtida a partir da transfecção de células CHO-dhfr- com o plasmídeo pED de expressão em células de mamíferos contendo o cDNA da GCR, seguido de amplificação gênica por MTX. A GCR foi detectada no extrato celular (~ 64 kDa) e secretada para o sobrenadante (63-69 kDa) em ensaios de western blotting, usando o anticorpo policlonal anti-GCR gerado neste trabalho. A enzima secretada hidrolisou o substrato 4-MUG e a sua produtividade foi estimada em 5,14 pg/célula/dia para o melhor subclone produtor, selecionado para a produção futura da GCR em larga escala
- Imprenta:
- Data da defesa: 24.06.2010
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ABNT
NOVO, Juliana Branco. Clonagem e expressão da glucocerebrosidase humana em células de ovário da hamster chinês (CHO). 2010. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2010. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-19082010-162050/. Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Novo, J. B. (2010). Clonagem e expressão da glucocerebrosidase humana em células de ovário da hamster chinês (CHO) (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-19082010-162050/ -
NLM
Novo JB. Clonagem e expressão da glucocerebrosidase humana em células de ovário da hamster chinês (CHO) [Internet]. 2010 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-19082010-162050/ -
Vancouver
Novo JB. Clonagem e expressão da glucocerebrosidase humana em células de ovário da hamster chinês (CHO) [Internet]. 2010 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-19082010-162050/
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