Estudos estruturais de septinas: explorando interações entre subunidades de filamentos de septinas humanas (2010)
- Autores:
- Autor USP: MARQUES, IVO DE ALMEIDA - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FFI
- Assuntos: PROTEÍNAS (ESTUDO); DIFRAÇÃO POR RAIOS X; CRISTALOGRAFIA
- Idioma: Português
- Resumo: Septinas constituem uma família conservada de proteínas de citoesqueleto pertencentes à superclasse das P-loop GTPases. Tais proteínas estão envolvidas em vários processos celulares. Em humanos, algumas septinas também estão relacionadas a casos de patologia. Suas seqüências são divididas em três domínios: domínio N-termina1, domínio GTPase e domínio C-terminal, que geralmente possui predição de coi/ed coi/. A principal característica da família está na capacidade de seus membros formarem filamentos compostos por septinas diferentes. Em 2007, Sirajuddin et aI apresentaram a primeira e única estrutura crista10gráfica de um complexo de septinas, formado pelas septinas 2, 6 e 7. Embora os domínios C-terminal estivessem presentes, eles não apresentaram densidade eletrônica. Assim, a estrutura não trouxe informação estrutural sobre tais domínios. Atualmente, existem quatro estruturas de septinas depositadas no PDB: complexo 2/6/7 e três estruturas SEPT2 sem o C-terminal. Dada a inexistência de informações estruturais a nível atômico para os domínios C-terminal e baixa qualidade das poucas estruturas existentes, propusemos a obtenção de informações bioquímicas e estruturais dos domínios C-terminal de septinas humanas e a obtenção da estrutura cristalográfica de SEPT3-GC (GTPase mais C-terminal). Vale ressaltar que SEPT3 pertence ao único grupo de septinas que possui predição de não apresentar um coi/ed coil no C-terminal e para o qual não há nenhuma estrutura disponível. Expressamos e purificamos os domínios C-terminal de SEPT2, SEPT6 e SEPT7 (SEPT2-C, SEPT6-C e SEPT7-C). Mostramos que eles formam homo dímeros e que SEPT6-C e SEPT7 -C formam um hetero dímero (‘K IND.D’ 15,8 nM), nomeado por SEPT67-C. Tanto SEPT6-C quanto SEPT7-C tendem a precipitar, ao passo que SEPT67-C e SEPT2-C (‘K IND.4’ ‘micro’M)são estáveis à altas concentraçõesTentamos, sem sucesso, cristalizar SEPT2-C e SEPT67-C. Via ressonância magnética nuclear, vimos que SEPT2-C possui duas regiões dinamicamente diferentes, uma central, em a-hélice, e duas extremidades desestruturadas. Neste ponto, planejamos construções para as regiões centrais dos domínios C-terminal, nomeadas SEPT2-CC, SEPT4-CC, SEPT6-CC e SEPT7-CC, referente às septinas 2, 4,6 e 7. Obtivemos cristais para SEPT2-CC, SEPT4-CC e SEPT6-CC. Contudo, resolvemos apenas a estrutura de SEPT4-CC, mostrando que a construção forma um coiled coil anti-paralelo. Então, propusemos, pela primeira vez, um possível mecanismo de formação de ligações cruzadas entre filamentos de septinas. Por outro lado, obtivemos cristais para uma construção contendo os domínios GTPase e C-terminal de SEPT3 (SEPT3-GC) e resolvemos sua estrutura (2,9 Á). Vimos que SEPT3-GC forma filamentos no cristal, utilizando as mesmas duas interfaces já descritas anteriormente para as outras estruturas. Comparamos a estrutura obtida com estruturas da literatura e observamos diferenças significativas em algumas regiões, além de diferença em relação à orientação das duas subunidades adjacentes. Deve ser notado que a estrutura de SEPT4-CC é a primeira estrutura de um coi/ed coi/ de septina e que a estrutura de SEPT3-GC é a primeira estrutura de uma septina do grupo L Em conclusão, o presente trabalho apresentou um conjunto de resultados os quais auxiliará no entendimento desta intrigante família de proteínas, inclusive em relação à formação de filamentos e as interações entre estes
- Imprenta:
- Local: São Carlos
- Data de publicação: 2010
- Data da defesa: 01.12.2010
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ABNT
MARQUES, Ivo de Almeida. Estudos estruturais de septinas: explorando interações entre subunidades de filamentos de septinas humanas. 2010. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2010. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-09122010-101622/. Acesso em: 29 mar. 2024. -
APA
Marques, I. de A. (2010). Estudos estruturais de septinas: explorando interações entre subunidades de filamentos de septinas humanas (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-09122010-101622/ -
NLM
Marques I de A. Estudos estruturais de septinas: explorando interações entre subunidades de filamentos de septinas humanas [Internet]. 2010 ;[citado 2024 mar. 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-09122010-101622/ -
Vancouver
Marques I de A. Estudos estruturais de septinas: explorando interações entre subunidades de filamentos de septinas humanas [Internet]. 2010 ;[citado 2024 mar. 29 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-09122010-101622/
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