Vias alternativas mitocondriais: estudos moleculares e bioquímicos de uma UCP-like de Aspergillus fumigatus (2011)
- Authors:
- Autor USP: CARDOSO, FERNANDA GOMES - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBI
- Subjects: ASPERGILLUS; MITOCÔNDRIAS; MICROBIOLOGIA; BIOQUÍMICA (ESTUDO)
- Keywords: Aspergillus fumigatus; Proteínas desacopladoras; Mitochondria; Uncoupling proteins
- Language: Português
- Abstract: A. fumigatus é um patógeno oportunista que causa infecções invasivas em hospedeiros imunocomprometidos. Estudos de respiração mitocondrial sugeriram a presença de componentes alternativos em sua cadeia respiratório envolvidos com processos de adaptação a ambientes adversos, como a proteína desacopladora (UCP). UCPs são proteínas mitocondriais cuja atividade dissipa o potencial de membrana gerado durante o transporte de elétrons. Um gene contendo características das três assinaturas moleculares das Proteínas Transferidoras de Energia foi clonado e sequenciado. O alinhamento das sequências genômica e de cDNA mostrou a presença de dois íntrons que, após o splicing, codifica uma proteína contendo 341 aminoácidos, com uma massa molecular de 37 kDa e um pI de 10,02. A fim de se avaliar as propriedades bioenergéticas da UCP-like, essa sequência foi clonada no vetor pYES2 e leveduras S. cerevisiae foram transformadas. Esferoplastos foram preparados e o potencial elétrico transmembrana mitocondrial (‘delta’’psi’) foi estimado. Os resultados mostraram que o ‘delta’’psi’ de esferoplastos de leveduras expressando a proteína UCP-like foi ligeiramente menor e que o decréscimo momentâneo do ‘delta’’psi’ associado com a fosforilação do ADP foi mais lento quando comparado com o controle, indicando desacoplamento da respiração. Além disso, esse comportamento dos esferoplastos recombinantes foi similar ao controle quando GDP foi adicionado ao meio de reação, sugerindo uma inibição da proteína por esse composto. Para sua caracterização funcional em sistemas reconstituídos, a sequência foi clonada no vetor pET SUMO. A expressão foi realizada em E. coli e a proteína recombinante, purificada por cromatografia em resina de níquel, foi analisada por Western blot com anticorpos anti-(His) 6-tag e anti-UCP2 e por espectrometria de massas. A formação dos lipossomos foiconfirmada através de medidas de distribuição de partícula por empalhamento de luz dinâmico, as quais sugeriram a formação de vesículas estáveis. Em adição, foi investigada a participação da UCP-like na proteção do A. fumigatus contra danos oxidativos. O nível de mRNA foi determinado por PCR em tempo real na presença de paraquat e menadiona. Em A. fumigatus, a presença dessas drogas pró-oxidantes resultou em um aumento no nível de mRNA desse gene, sugerindo que essa proteína possa também fazer parte de um sistema de defesa antioxidante do fungo
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2011
- Data da defesa: 27.04.2011
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ABNT
CARDOSO, Fernanda Gomes. Vias alternativas mitocondriais: estudos moleculares e bioquímicos de uma UCP-like de Aspergillus fumigatus. 2011. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2011. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-08012016-124834/. Acesso em: 16 abr. 2024. -
APA
Cardoso, F. G. (2011). Vias alternativas mitocondriais: estudos moleculares e bioquímicos de uma UCP-like de Aspergillus fumigatus (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-08012016-124834/ -
NLM
Cardoso FG. Vias alternativas mitocondriais: estudos moleculares e bioquímicos de uma UCP-like de Aspergillus fumigatus [Internet]. 2011 ;[citado 2024 abr. 16 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-08012016-124834/ -
Vancouver
Cardoso FG. Vias alternativas mitocondriais: estudos moleculares e bioquímicos de uma UCP-like de Aspergillus fumigatus [Internet]. 2011 ;[citado 2024 abr. 16 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17131/tde-08012016-124834/
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