Padronização de uma reação em cadeia pela polimerase em nested (nested-PCR) para detecção e diferenciação das espécies de Cryptosporidium spp e caracterização molecular de Cryptosporidium isolados de roedores sinantrópicos (2011)
- Autores:
- Autor USP: SILVA, SHEILA OLIVEIRA DE SOUZA - FMVZ
- Unidade: FMVZ
- Sigla do Departamento: VPS
- Assuntos: PROTOZOOSES EM ANIMAL; REAÇÃO EM CADEIA POR POLIMERASE
- Palavras-chave do autor: Cryptosporidium; Cryptosporidium; PCR; PCR; Rodents; Roedores
- Idioma: Português
- Resumo: Cryptosporidium spp são protozoários cosmopolita que acometem peixes, répteis, anfíbios, aves e mamíferos. Mais de 20 espécies são reconhecidas dentro deste gênero. Os roedores, grupos de organismos abundantes e ubíquos, têm sido considerados reservatórios de Cryptosporidium para humanos e animais de produção. As seqüências codificadoras da menor unidade ribossômica (18S rRNA) de Cryptosporidium spp caracterizam-se por intercalações entre regiões conservadas e polimórficas ao longo dos seus 1700 pares de bases. O objetivo deste estudo foi desenhar primers específicos para o gene 18S rRNA, potencialmente capazes de amplificar qualquer espécie ou genótipo de Cryptosporidium spp. e avaliar os atributos diagnósticos da nested-PCR baseadas em tais sondas. O desenho dos primers foi realizado de forma a amplificar um segmento de menor dimensão possível para se maximizar a sensibilidade do ensaio molecular e preservando o potencial discriminatório das seqüências amplificadas. A nestedPCR padronizada neste estudo (nPCR-SH) foi comparada com outro ensaio similar que vem sendo largamente utilizado para detecção e identificação de Cryptosporidium spp. no mundo todo (nPCR-XIAO). Também se objetivou caracterizar molecularmente amostras de Cryptosporidum spp. isoladas de roedores sinantrópicos, empregando-se estas sondas e sondas moleculares direcionadas. Foram capturados 45 roedores em áreas públicas da região urbana da cidade de Umuarama, Paraná. As amostras foram submetidas a trêsprovas moleculares, sendo duas direcionadas ao gene18S rRNA (nPCR-SH e nPCR-XIAO) e outra, ao gene codificador da actina. A nPCR-SH foi testada com as amostras de Cryptosporidum parvum, Cryptosporidum andersoni, Cryptosporidum meleagridis, Cryptosporidum hominis, Cryptosporidum canis, Cryptosporidum serpentis e todas foram positivas. Dezesseis amostras de roedores foram positivas para a nPCR-SH, seis pela nPCR-XIAO e cinco pela nPCR dirigida ao gene codificador da actina. O sequenciamento dos fragmentos amplificados possibilitou a identificação de Cryptosporidum muris em três amostras de Rattus rattus, e dois novos genótipos de Cryptosporidium, os genótipos rato II e III. Genótipo rato II foi encontrado em uma amostra de Mus musculus e o genótipo III em doze amostras, sendo cinco Rattus rattus e sete Mus musculus. Os resultados deste estudo demonstraram que os primers desenhados para detecção do Cryptosporidium spp em amostras de fezes foram mais eficientes em amplificar regiões que permitem a distinção entre as espécies do parasito do que aqueles usados na PCR-XIAO. Nas amostras estudadas não foram encontrados genótipos ou espécies de Cryptosporidium que podem ser transmitidos a outras espécies como os zoonóticos, o que sugere que a importância destes animais na transmissão zoonótica de criptosporidiose é pouco relevante
- Imprenta:
- Data da defesa: 12.08.2011
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ABNT
SILVA, Sheila Oliveira de Souza. Padronização de uma reação em cadeia pela polimerase em nested (nested-PCR) para detecção e diferenciação das espécies de Cryptosporidium spp e caracterização molecular de Cryptosporidium isolados de roedores sinantrópicos. 2011. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2011. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-24042012-151514/. Acesso em: 23 abr. 2024. -
APA
Silva, S. O. de S. (2011). Padronização de uma reação em cadeia pela polimerase em nested (nested-PCR) para detecção e diferenciação das espécies de Cryptosporidium spp e caracterização molecular de Cryptosporidium isolados de roedores sinantrópicos (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-24042012-151514/ -
NLM
Silva SO de S. Padronização de uma reação em cadeia pela polimerase em nested (nested-PCR) para detecção e diferenciação das espécies de Cryptosporidium spp e caracterização molecular de Cryptosporidium isolados de roedores sinantrópicos [Internet]. 2011 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-24042012-151514/ -
Vancouver
Silva SO de S. Padronização de uma reação em cadeia pela polimerase em nested (nested-PCR) para detecção e diferenciação das espécies de Cryptosporidium spp e caracterização molecular de Cryptosporidium isolados de roedores sinantrópicos [Internet]. 2011 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10134/tde-24042012-151514/ - Molecular diversity of the VP2 of Carnivore protoparvovirus 1 (CPV-2) of fecal samples from Bogotá
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