Expressão de genes de referência em cana-de-açúcar:: quantificação relativa e estabilidade via PCR em tempo real (2005)
- Autores:
- Autor USP: FIGUEIRA, ANTONIO VARGAS DE OLIVEIRA - CENA
- Unidade: CENA
- Assuntos: EXPRESSÃO GÊNICA; CANA-DE-AÇÚCAR
- Idioma: Português
- Resumo: Objetivos: identificar genes com maior estabilidade de expressão em diversos tecidos a serem empregados como referência na quantificação relativa da expressão via PCR em tempo real (qPCR) em cana-de-açúcar. Metodologia RNA de meristema, colmo, inflorescência, limbo e raízes foi extraído com Trizol, seguido da síntese de cDNA. Foram desenhados iniciadores para os genes Actin, GAPDH, Tubulin, UbiQ1 e UbiQ2 com os programas Primer3 e NetPrimer. A expressão gênica foi verificada por qPCR no RotorGene-3000 utilizando-se SYBR Green. Os ciclos-limite de leitura (Ct) e a eficiência da reação (E) foram usados na quantificação da expressão, e os resultados foram padronizados pelos programas NormFinder e GeNorm, que calculam fatores de normalização da expressão e organizam os melhores genes de referência de acordo com o tecido ou valor de estabilidade da combinação de dois genes. Resultados O gene GAPDH foi o mais estável, seguido por Actin, UbiQ1, Tubulin e UbiQ2. Na análise par-a-par, UbiQ1/UbiQ2 mostrou-se o mais constante, enquanto que na análise por tecidos, o par Actin/UbiQ1 foi o mais estável. Conclusão Pelo resultado do GeNorm, o gene individual mais estável foi o GAPDH, e a melhor combinação foi Actin/UbiQ1. Baseado no NormFinder, o melhor gene também foi GAPDH, porém o melhor par foi UbiQ1/UbiQ2. Assim, a combinação dos resultados mostra uma escala de estabilidade favorável à combinações com UbiQ1/Actin/GAPDH, sendo estes indicados como referência em ensaios de qPCR
- Imprenta:
- Nome do evento: Simpósio Internacional de Iniciação Científica da Universidade de São Paulo - SIICUSP
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ABNT
OLIVEIRA, João Felipe Nebó Carlos de et al. Expressão de genes de referência em cana-de-açúcar:: quantificação relativa e estabilidade via PCR em tempo real. 2005, Anais.. São Paulo: USP, 2005. . Acesso em: 26 abr. 2024. -
APA
Oliveira, J. F. N. C. de, Almeida, R. S., Benedito, V. A., & Figueira, A. V. de O. (2005). Expressão de genes de referência em cana-de-açúcar:: quantificação relativa e estabilidade via PCR em tempo real. In . São Paulo: USP. -
NLM
Oliveira JFNC de, Almeida RS, Benedito VA, Figueira AV de O. Expressão de genes de referência em cana-de-açúcar:: quantificação relativa e estabilidade via PCR em tempo real. 2005 ;[citado 2024 abr. 26 ] -
Vancouver
Oliveira JFNC de, Almeida RS, Benedito VA, Figueira AV de O. Expressão de genes de referência em cana-de-açúcar:: quantificação relativa e estabilidade via PCR em tempo real. 2005 ;[citado 2024 abr. 26 ] - Theobroma cacao cacao
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