Análise dos mecanismos de regulação epigenéticos e pós-transcricionais durante a geração in vitro de células T regulatórias induzidas (iTreg) a partir de células T naive de sangue de cordão umbilical (2014)
- Autores:
- Autor USP: SCHIAVINATO, JOSIANE LÍLIAN DOS SANTOS - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RGE
- Assuntos: LINFÓCITOS T; RNA; TÉCNICAS GENÉTICAS
- Idioma: Português
- Resumo: Os linfócitos T regulatórios (Tregs) atuam de maneira fundamental no controle periférico da tolerância, regulando a homeostase do sistema imune. Além disso, participam do controle de doenças auto-imunes, da tolerância de transplantes e ainda, do escape imune de tumores e infecção por HIV. O papel das Tregs em diferentes desordens imunes atrai um grande interesse para estas células, devido ao seu enorme potencial terapêutico. As Tregs podem ser de ocorrência natural (nTregs), derivadas do timo ou induzidas na periferia a partir de células naive (pTregs). A geração de células T regulatórias induzidas (iTregs) pode ocorrer a partir de células T CD4+ in vitro através do cultivo com antígenos ou ativadores policlonais na presença de citocinas imunossupressivas, ou ainda, pelo cocultivo de células T com células estromais mesenquimais. Ambos os tipos de Tregs possuem fenótipo similar e a expressão do fator de transcrição forkhead box P3 (FOXP3) parece ser essencial para a manutenção da homeostase imunológico. Porém, ainda não se compreende totalmente os mecanismos que levam a indução de células T em iTregs. Apenas, sabe-se que a sinalização via TCR (T cell receptor) é um fator importante nessa diferenciação. Além disso, trabalhos evidenciam que as células T naive CD4+ de sangue periférico também podem gerar iTregs através da adição de TGF-β na presença de IL-2 in nitro. Assim, neste trabalho objetivamos estabelecer e caracterizar um modelo experimental in nitro para a geração de iTregs a partir de células T naive CD4+ de sangue de cordão umbilical, para então avaliarmos o controle epigenético, ligado ao estado de metilação de ilhas CpG presentes em regiões promotores, avaliar a participação desses fatores no controle transcricional de linfócitos efetores e regulatórios. Adicionalmente, avaliamos o perfil de expressão de mRNAs e microRNAs em diferentesestágios, de forma a permitir a identificação de vias ativadas ou inativadas durante esse processo. Para isso, as células T naive isoladas de sangue de cordão umbilical foram cultivadas na presença de IL-2 em combinação, ou não, com TGF-β e atRA (All-trans retinoic acid). As células geradas foram caracterizadas imunofenotipicamente, analisadas em relação ao estado de metilação, tiveram seu potencial imunossupressor avaliado e a análise de expressão de RNA mensageiro e de microRNAs, por microarrays. Os resultados encontrados suportam evidencias de que, as células geradas em cultura com IL-2, TGF-β e atRA, após ativação da via TCR, apresentam similaridade imunofenotípica com as células T regulatórias naturais (expressando FOXP3, GITR, LAP, TNFR2 CD69 e ausência do CD127), assim como capacidade supressora, porém ainda apresentam elevado nível de metilação no lócus do FOXP3, apesar de possuir início do processo de desmetilação, através da atuação das enzimas TETs que geram a 5-hidroximetilcitosina, principalmente na região desmetilada específica de células T regulatórias (TSDR). Foi possível identificar um conjunto de 24 microRNAs expressos exclusivamente nas células cultivadas com IL-2, TGF- β e atRA, dentre esses o miR-lOa e o miR-23a, além da repressão de diversos alvos desses microRNAs (como a repressão do receptor de IL-6), revelando a atuação de diferentes vias de sinalização durante o processo de geração de células iTregs (como a sinalização de Notch e ausência da sinalização dos Toll-like).
- Imprenta:
- Local: Ribeirão Preto
- Data de publicação: 2014
- Data da defesa: 08.10.2014
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ABNT
SCHIAVINATO, Josiane Lilian dos Santos. Análise dos mecanismos de regulação epigenéticos e pós-transcricionais durante a geração in vitro de células T regulatórias induzidas (iTreg) a partir de células T naive de sangue de cordão umbilical. 2014. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2014. . Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Schiavinato, J. L. dos S. (2014). Análise dos mecanismos de regulação epigenéticos e pós-transcricionais durante a geração in vitro de células T regulatórias induzidas (iTreg) a partir de células T naive de sangue de cordão umbilical (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Schiavinato JL dos S. Análise dos mecanismos de regulação epigenéticos e pós-transcricionais durante a geração in vitro de células T regulatórias induzidas (iTreg) a partir de células T naive de sangue de cordão umbilical. 2014 ;[citado 2024 abr. 24 ] -
Vancouver
Schiavinato JL dos S. Análise dos mecanismos de regulação epigenéticos e pós-transcricionais durante a geração in vitro de células T regulatórias induzidas (iTreg) a partir de células T naive de sangue de cordão umbilical. 2014 ;[citado 2024 abr. 24 ] - Papel de Notch e NF-kB na regulação de fatores de transcrição durante a diferenciação in vitro de células T a partir de células progenitoras hematopoéticas CD34+
- Evaluation of the role of C-REL, subunit of NF-B, in transcriptional regulation during in vitro induction of regulatory T cells (ITREG) by chromatin immunoprecipitation using microarrays (CHIP-CHIP)
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