Caracterização bioquímica e funcional de um inibidor recombinante de miotoxinas, do tipo-α, da serpente Bothrops alternatus (2015)
- Autores:
- Autor USP: SOUSA, TIAGO SAMPAIO DE - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Sigla do Departamento: 604
- Assuntos: VENENOS DE ORIGEM ANIMAL; SERPENTES; VIPERIDAE; FOSFOLIPASES
- Palavras-chave do autor: aPLI; Biochemical characterization; Bothrops alternatus; Caracterização bioquímica; Inibição de miotoxicidade; Inibidor de Fosfolipase A2; Miotoxinas; Myotoxin inhibitor; Myotoxins; Phospholipase A2 inhibitor; rBaltMIP
- Idioma: Português
- Resumo: Fosfolipases A2 (PLA2s) são enzimas abundantes em peçonhas de serpentes do gênero Bothrops, possuindo uma grande variedade de efeitos farmacológicos e/ou tóxicos, como miotóxico, causador de necrose muscular. Em busca de novos fármacos de interesse médico e científico, os inibidores de fosfolipases A2 (PLIs) tornaram-se importantes alvos de pesquisa nos últimos anos. Tendo isto em vista, o presente trabalho teve como objetivo a caracterização bioquímica e funcional de um inibidor de fosfolipase A2 miotóxica do tipo alfa (αBaltMIP) de B. alternatus em sua forma recombinante. Para os estudos de neutralização funcional foram utilizadas as toxinas da peçonha de Bothrops jararacussu: Lys49 PLA2-simile BthTX-I e a Asp49 PLA2 BthTX-II. O processo de purificação das toxinas de B. jararacussu consistiu em dois passos cromatográficos: exclusão molecular seguida de troca iônica, sendo o grau de pureza avaliado por HPLC. A expressão heteróloga do inibidor recombinante α-BaltMIP foi induzida em leveduras Pichia pastoris. O inibidor purificado, denominado rBaltMIP, apresentou-se como uma proteína pura com pl de 5,8, massa molecular de ~21 kDa por SDS-PAGE e 19,5 kDa por MALDI/TOF MS e com conteúdo de carboidratos de 10%. Após o sequenciamento dos peptídeos trípticos obtidos, os resultados foram comparados com outros αPLIs depositados em bancos de dados, observando-se 100% de identidade entre o rBaltMIP e o seu inibidor nativo αBaltMIP, e de 92 a 96% com os demais inibidores analisados. Para as toxinas BthTX-I e BthTX-II, as concentrações efetivas (CE50) para as atividades miotóxicas medidas através dos níveis plasmáticos de CK foram de 0,1256 µg/µL e de 0,6183 µg/µL, respectivamente, e quando incubadas com o rBaltMIP houve neutralização de até 65% da miotoxicidade induzida por estas enzimas. Já nos ensaios de formação de edema de pata, foram obtidas as CE50 de 0,02581 µg/µL e0,02810 µg/µL, respectivamente, com neutralização do edema pelo rBaltMIP de até 40%, mostrando-se um inibidor viável para complementar a soroterapia antiofídica sem, no entanto, ser imunogênico. Reforçando esta hipótese, experimentos de neutralização da miotoxicidade feitos com a miotoxina BthTX-I mostraram que o rBaltMIP foi mais eficiente em inibir os danos musculares que o próprio soro antiofídico quando usado isoladamente. Assim, devido a gravidade dos envenenamentos e a baixa neutralização de seus efeitos locais, como a miotoxicidade, pelo soro antiofídico usado atualmente, o estudo do rBaltMIP como inibidor de PLA2s do grupo II de serpentes torna-se promissor devido às suas possíveis aplicações clínicas, podendo neutralizar com maior rapidez, eficiência e especificidade as ações tóxicas de peçonhas ofídicas
- Imprenta:
- Local: Ribeirão Preto
- Data de publicação: 2015
- Data da defesa: 30.09.2015
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ABNT
SOUSA, Tiago Sampaio de. Caracterização bioquímica e funcional de um inibidor recombinante de miotoxinas, do tipo-α, da serpente Bothrops alternatus. 2015. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2015. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-02052016-161314/. Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Sousa, T. S. de. (2015). Caracterização bioquímica e funcional de um inibidor recombinante de miotoxinas, do tipo-α, da serpente Bothrops alternatus (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-02052016-161314/ -
NLM
Sousa TS de. Caracterização bioquímica e funcional de um inibidor recombinante de miotoxinas, do tipo-α, da serpente Bothrops alternatus [Internet]. 2015 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-02052016-161314/ -
Vancouver
Sousa TS de. Caracterização bioquímica e funcional de um inibidor recombinante de miotoxinas, do tipo-α, da serpente Bothrops alternatus [Internet]. 2015 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-02052016-161314/
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