Padrão de expressão dos mRNAs dos genes das famílias fos e jun na diferenciação neuronal das células PC12 em resposta a FGF-2 e dibutiril cAMP e expressão do receptor FGF-2 (FGFR1'beta'a1) em E. coli (1998)
- Authors:
- Autor USP: ABREU, PATRÍCIA ANTONIA ESTIMA - IB
- Unidade: IB
- Sigla do Departamento: BIO
- Assunto: GENÉTICA
- Language: Português
- Abstract: O FGF-2 pertence a uma família de polipeptídeos estruturalmente relacionados e envolvidos em processos biológicos como proliferação, diferenciação, angiogênese e desenvolvimento embrionário. Os FGFs exercem suas ações através da ligação e ativação de uma família de receptores de membrana, que consiste dos produtos de pelo menos 15 sítios simples de "splicing" em quatrogenes: fgfR1(flg), fgfR2 (bek), fgflR3 e fgflR4. Todos os FGFRs são receptores tirosina quinase que possuem dois ou três domínios IgG "like" na região extracelular, uma região transmembrânica simples e um domínio tirosina quinase descontinuo citoplasmático. A linhagem celular PC12 é derivada de um feocromocitoma da medula da glâdula adrenal de rato. Quando cultivadas em condições normais, estas células assemelham-se a células cromafínicas da medula fetal. Entretanto, quando cultivadas na presença de fatores neutroficos como NGF ou FGFs, as células PC12 param de proliferar e diferenciam-se em células com características de neurônios simpáticos. Foi mostrado que AMP cíclico potencializa a indução de neuritos pelo FGF-2 em células PC12 (HO e Raw, 1992). Estas mudanças são acompanhadas por alterações na expressão de genes de resposta primária. Alguns destes genes pertencem à famílias fos e jun. A família fos compreende os genes c-fos, fra-1, fra-2 e fos B, enquanto a família fun compreende c-jun, jun B e jun D. As proteinas FOS e JUN formam um complexo dimérico que interage com o sítio AP-1 deligação ao DNA com atividade transcripcional regulatória. A fim de investigarmos o efeito sinergístico de cAMP sobre a extensão de neuritos promovido pelo FGF-2, nós estudamos a expressão de todos os membros das famílias fos e jun após tratamento com FGF-2 e/ou dibutiril cAMP (dbcAMP) em diferentes períodos de tempo. As células PC12 foram estimuladas com 1mM de dbcAMP e/ou 10ng/ml FGF-2. Os resultados apresentados neste trabalho mostraram que o padrão de expressão das famílias dos genes fos e jun por Northerm-Blot em células PC12 tratadas com FGF-2 e dbcAMP, de uma maneira geral, foi o mesmo com o tratamento com fgf-2 ou dbcAMP sozinhos. Entretanto, com duas diferenças: 1) O duplo tratamento aumentou o nível de indução dos genes das famílias fos e jun, com exceção de c-jun. Algumas respostas foram somatorias (c-fos e jun B) enquanto outras foram sinergísticas (fos B, fra-2 e fra-1). 2) A indução dos genes fos e jun tornou-se mais prolongada, com exceção de c-jun e c-fos,. Além disso, nós mostramos a expressão e purificação do domínio extracelular do FGFR1'beta'al. O cDNA codificante para o domínio extracelular do FGFR1'beta'al foi gerado por PCR, usando-se oligonucleotídeos com sítios de restrição BamH I e Hind III nas extremidades 5'e 3'respectivamente. Os produtos de PCR foram clonados nos mesmos sítios de restrição em pRSETA (Invitrogen). O sistema pRSETA possibilita altos níveis de expressão da proteína recombinante é controlada pelo promotordo fago T7. E.coli BL21(DE3) transformada com o plasmídeo recombinante foi induzida com 1 mM IPTG e expressou a proteína em forma de corpúsculos de inclusão. Os corpúsculos de inclusão, depois de sonicados, foram solubilizados com 8 M uréia e 10 mM de 'beta'-mercaptoetanol. O produto solubilizado foi diluído 80 vezes para renaturar a proteína recombinante. A proteína recombinante foi então purificada em resina quelante de metal (Pharmacia). O domínio extracelular em camundongo. A caracterização do antisoro por Western-blot mostrou que o antisoro exibiu reatividade específica
- Imprenta:
- Data da defesa: 30.04.1998
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ABNT
ABREU, Patricia Antonia Estima. Padrão de expressão dos mRNAs dos genes das famílias fos e jun na diferenciação neuronal das células PC12 em resposta a FGF-2 e dibutiril cAMP e expressão do receptor FGF-2 (FGFR1'beta'a1) em E. coli. 1998. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 1998. . Acesso em: 23 abr. 2024. -
APA
Abreu, P. A. E. (1998). Padrão de expressão dos mRNAs dos genes das famílias fos e jun na diferenciação neuronal das células PC12 em resposta a FGF-2 e dibutiril cAMP e expressão do receptor FGF-2 (FGFR1'beta'a1) em E. coli (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. -
NLM
Abreu PAE. Padrão de expressão dos mRNAs dos genes das famílias fos e jun na diferenciação neuronal das células PC12 em resposta a FGF-2 e dibutiril cAMP e expressão do receptor FGF-2 (FGFR1'beta'a1) em E. coli. 1998 ;[citado 2024 abr. 23 ] -
Vancouver
Abreu PAE. Padrão de expressão dos mRNAs dos genes das famílias fos e jun na diferenciação neuronal das células PC12 em resposta a FGF-2 e dibutiril cAMP e expressão do receptor FGF-2 (FGFR1'beta'a1) em E. coli. 1998 ;[citado 2024 abr. 23 ]
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