Isolamento e caracterização de clones da família de glicoproteínas (Tc-85) de Trypanosoma cruzi (2000)
- Authors:
- Autor USP: OLIVEIRA, DÉBORA ROSE DE - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QBQ
- Subjects: BIOLOGIA MOLECULAR; PROTEINAS (METABOLISMO)
- Language: Português
- Abstract: Vários laboratórios descreveram moléculas que estão envolvidas na invasão do Trypanosoma cruzi à célula hospedeira. Nosso laboratório foi o primeiro a descrever moléculas de 85 kDa pertencentes a uma família de glicoproteínas (Tc-85) que possuem graus diferentes de homologia de seqüência com os membros da superfamília das gp85/transialidases. Um componente acídico (Tc85-11) da família Tc-85 que se liga à iaminina e a receptores da célula hospedeira foi clonado e expresso (Giordano etal., JBC 274, 3461,1999). Nós levantamos a hipótese de que o polimorfismo dos diferentes membros da família Tc-85 poderiam determinar diferentes propriedades da adesão à célula hospedeira. Para provar tal hipótese, uma biblioteca genâmica de Tc-85 utilizando o vetor PTEX e os seguintes "primers": R-1 (5 ') ATGTCCCGGCGTGTGTTTACTTCC e GPI-2(3') CACAAAGTCGCAAAGCCCCACAGTCC, foi digerida com enzimas de restrição resultando em fragmentos de tamanho esperado (-2-2,5 kb) em 91% dos clones selecionados. Treze clones foram seqüenciados em suas extremidades 5' e 3'. Nenhum era idêntico entre si apesar da variabilidade da homologia de seqüência (40-70%). No entanto, quando comparadas as regiões codantes para o peptídeo sinal foi encontrada uma homologia de 90%. Para assegurar a clonagem de genes funcionais, uma biblioteca de CDNA foi construída com "primers" degenerados (5'-ATTTTTGTTCCGCAGAAGACGCAGGTG, 3'- ATTCAGTGGGCGGTTGTACAGAAAGAC) por transcrição reversa de seqüências conservadas da super famíliadas 9p85/transialidases, excluindo a seqüência codante para o peptídeo sinal e a seqüência codante para âncora de GPI (presença de aminoácidos hidrofóbicos). Os cDNAs foram amplificados e cionados no vetor de expressão pCR'T7/NT-TOPO. Foram selecionados 60 clones que foram submetidos à análise de restrição e 90% deles mostraram fragmentos com tamanho esperado. As proteinas de fusão de 4 destes clones foram reconhecidas em Western blot por um ) anticorpo policlonal feito contra um fragmento da Tc85-11 (H3.3). As seqüências obtidas da extremidade 5' revelou que os quatro clones pertencem à superfamilia das gp85-11 mostrou uma homologia de 60-80% e uma identidade de 40-70% na seqüência de aminoácidos. Estes dados confirmam a heterogeneidade da família da Tc-85 que é expressa pelo parasita. Ademais, a expressão de elevadas quantidades das proteínas correspondentes permitirá identificação específicas de tripomastigotas
- Imprenta:
- Data da defesa: 23.11.2000
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ABNT
OLIVEIRA, Débora Rose de. Isolamento e caracterização de clones da família de glicoproteínas (Tc-85) de Trypanosoma cruzi. 2000. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2000. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-11112014-144008/. Acesso em: 23 abr. 2024. -
APA
Oliveira, D. R. de. (2000). Isolamento e caracterização de clones da família de glicoproteínas (Tc-85) de Trypanosoma cruzi (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-11112014-144008/ -
NLM
Oliveira DR de. Isolamento e caracterização de clones da família de glicoproteínas (Tc-85) de Trypanosoma cruzi [Internet]. 2000 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-11112014-144008/ -
Vancouver
Oliveira DR de. Isolamento e caracterização de clones da família de glicoproteínas (Tc-85) de Trypanosoma cruzi [Internet]. 2000 ;[citado 2024 abr. 23 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-11112014-144008/
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