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Caracterização da localização subcelular da proteina THI1 de Arabidopsis thaliana (2002)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: CHABREGAS, SABRINA MOUTINHO - ESALQ
  • USP Schools: ESALQ
  • Sigla do Departamento: LGN
  • Subjects: CÉLULAS CLONAIS; EXPRESSÃO GÊNICA; GENES; PROTEÍNAS DE PLANTAS
  • Language: Português
  • Abstract: O produto do gene thi1 de Arabidopsis thaliana está provavelmente envolvido na biossíntese de tiamina (vitamina B1) e na proteção do DNA organelar contra danos. Estudos sobre a biossíntese da tiamina em plantas sugerem uma localização plastidial para este mecanismo, o que está de acordo com a existência de um peptídeo de trânsito cloroplástico (TP) na região N-terminal de THI1. Por outro lado, em leveduras a tiamina é sintetizada em mitocôndrias. Interessantemente, o cDNA de thi1 de A. thaliana complementa uma cepa de levedura com disrupção no gene homólogo thi4. A análise da seqüência de aminoácidos de THI1 revelou a presença de uma região capaz de formar uma estrutura do tipo a-hélice anfifílica, freqüentemente encontrada em preseqüências mitocondriais, localizada logo após o peptídeo de trânsito cloroplástico. O papel desta região na localização da proteína THI1 nas mitocôndrias foi comprovado a partir de ensaios envolvendo construções de genes quiméricos (contendo ou não a putativa seqüência de direcionamento mitocondrial) e um gene repórter (uidA). Estas construções foram introduzidas em plantas de tabaco e a localização da atividade GUS foi determinada nas frações subcelulares das plantas transgênicas. Análise direta da presença de THI1 nas mitocôndrias e cloroplastos de Arabidopsis foi realizada via imunolocalização. Também foram fornecidas evidências que as duas isoformas organelares são codificadas por um único transcrito nuclear. Experimentos detranscrição/tradução 'in vitro' indicaram a ocorrência de dois produtos da tradução a partir de códons de iníciação em fase de leitura. Mutações sítio-específicas na seqüência de thi1 acoplados à experimentos usando a proteína fluorescente verde (GFP) mostraram que a tradução no primeiro AUG determina a localização da proteína nos cloroplastos, enquanto que a tradução no segundo AUG é responsável pelo endereçamento da proteína às mitocôndrias. ) A análise do contexto para início da tradução revelou que a região em torno do primeiro AUG é mais favorável para a tradução do mRNA de thi1. Além disso, observou-se a presença de uma forte estrutura em "grampo de cabelo" próximo ao segundo códon AUG, indicando um contexto subótimo capaz de interferir na tradução. Estas observações confirmaram os dados obtidos a partir da tradução 'in vitro' na qual a iniciação se dá preferencialmente no primeiro AUG o que pode sugerir uma maior necessidade da proteína nos plastídeos
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 08.02.2002
  • Acesso online ao documento

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    Exemplares físicos disponíveis nas Bibliotecas da USP
    BibliotecaCód. de barrasNúm. de chamada
    ESABC10500022296t575.1 C429c ex.2 78839
    How to cite
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    • ABNT

      CHABREGAS, Sabrina Moutinho; SILVA FILHO, Márcio de Castro. Caracterização da localização subcelular da proteina THI1 de Arabidopsis thaliana. 2002.Universidade de São Paulo, Piracicaba, 2002. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-26082002-142944/ >.
    • APA

      Chabregas, S. M., & Silva Filho, M. de C. (2002). Caracterização da localização subcelular da proteina THI1 de Arabidopsis thaliana. Universidade de São Paulo, Piracicaba. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-26082002-142944/
    • NLM

      Chabregas SM, Silva Filho M de C. Caracterização da localização subcelular da proteina THI1 de Arabidopsis thaliana [Internet]. 2002 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-26082002-142944/
    • Vancouver

      Chabregas SM, Silva Filho M de C. Caracterização da localização subcelular da proteina THI1 de Arabidopsis thaliana [Internet]. 2002 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/11/11137/tde-26082002-142944/

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