Construção e análise de mutantes fluorescentes da troponina I (2001)
- Authors:
- Autor USP: OLIVEIRA, DEODORO CAMARGO SILVA GONÇALVES DE - IQ
- Unidade: IQ
- Sigla do Departamento: QBQ
- Subjects: AMINOÁCIDOS; MÚSCULO ESQUELÉTICO; BIOLOGIA MOLECULAR
- Language: Português
- Abstract: A troponina (Tn) regula a contração do músculo estriado esquelético de vertebrados. Ela é composta de três subunidades: troponina 1 (Tnl), troponina C (TnC) e troponina T (TnT). A Tnl tem a função inibitória que é neutralizada pela ligação de Ca2+ nos sítios regulatórios do N-domínio da TnC, e a TnT posiciona o complexo no filamento fino. Para monitorar o sinal do Ca2+ sendo transmitido da TnC para a Tnl as propriedades espectrais únicas do 5-hidroxitriptofano (5HW) foram utilizadas. O 5HW foi incorporado em mutantes pontuais de Tnl com um único códon para triptófano. Foram identificadas duas sondas espectrais intrínsecas na Tnl capazes de detectar a ligação de Ca2+ na Tn: as Tnls com 5HW nas posições 100 e 121. Complexos troponina reconstituídos com estes mutantes fluorescentes de Tnl, Tn-TnlF1OOHW e Tn-TnlMI2IHW, apresentaram respectivamente 12 e 70% de aumento na intensidade do espectro de emissão devido à ligação de Ca2+ na TnC. Nos complexos binários (TnC-Tnl) as Tnls com 5HW nas posições 106 e 121 também captam a ligação do Ca2+ na TnC. A análise da fluorescência destas sondas demonstrou que: 1) as regiões da Tnl que respondem ao N-domínio regulatório da TnC ocupado com Ca2+ são a região inibitória da Tnl, resíduos 96 até 116, e a região vizinha que inclui a posição 121 da Tnl; 2) mutações pontuais e a incorporação de 5HW na Tnl 2+ podem afetar tanto a afinidade como a cooperatividade da ligação de Ca2+ na TnC, confirmando o papel da Tnl em modular a afinidadeda TnC por Ca2+; 3) as constantes de dissociação de Ca2+ surpreendentemente altas, Kd 'DA ORDEM DE' 10-8 M, calculadas a partir dos sinais das sondas na região inibitória da Tnl, sugerem a possibilidade de que os sítios do domínio N-terminal da TnC sejam os sítios de ligação Ca2+ de maior afinidade no complexo troponina
- Imprenta:
- Data da defesa: 10.08.2001
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ABNT
OLIVEIRA, Deodoro Camargo Silva Gonçalves de. Construção e análise de mutantes fluorescentes da troponina I. 2001. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2001. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-01102006-180039/. Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Oliveira, D. C. S. G. de. (2001). Construção e análise de mutantes fluorescentes da troponina I (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-01102006-180039/ -
NLM
Oliveira DCSG de. Construção e análise de mutantes fluorescentes da troponina I [Internet]. 2001 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-01102006-180039/ -
Vancouver
Oliveira DCSG de. Construção e análise de mutantes fluorescentes da troponina I [Internet]. 2001 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/46/46131/tde-01102006-180039/
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