Expressão e purificação do fator de terminação de transcrição RHO de Caulobacter crescentus (2002)
- Authors:
- Autor USP: MARQUES, MARILIS DO VALLE - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: MICROBIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: A terminação de transcrição em bactérias representa um importante caminho na regulação da expressão gênica. O fator Rho catalisa a terminação de transcrição, dependente de ATP, ligando-se ao mRNA nascente e liberando o mesmo da RNA polimerase devido a sua função de RNA-DNA helicase. Rho é uma proteína multimérica que consiste de seis subunidades arranjadas em uma estrutura na forma de anel. Um trabalho anterior de nosso laboratório permitiu o isolamento de uma linhagem de Caulobacter na qual o gene rho está interrompido pela inserção do transposon Tn5. A proteína Rho foi truncada no resíduo Gly112, que está localizado imediatamente antes do motivo RNP1 de ligação ao mRNA. Esta linhagem mostrou um fenótipo de alta sensibilidade a estresses, especialmente estresse oxidativo. Neste trabalho mostramos a expressão e a purificação da proteína Rho de Caulobacter crescentus, assim como a obtenção do soro policlonal anti-Rho. Por meio de PCR, amplificamos a região codificadora de Rho, que foi clonada no vetor pProEx, que é um vetor de expressão de proteínas em E. coliApós indução com IPTG, a proteína Rho foi expressa em fusão com uma seqüência de 6 histidinas (6xHis) apresentando um tamanho aproximado de 60 KDa. Em seguida, a proteína foi purificada por cromatografia de afinidade em resina de níquel. O soro policlonal anti-Rho foi obtido por imunização de dois coelhos, através de injeções subcutâneas e intravenosas da proteína purificada em suspensão noadjuvante de Freund. Uma vez obtido o soro, os extratos da linhagem selvagem NA1000 e da linhagem mutante rho- foram testados por ensaio de "Western Blot" e imunoprecipitação, mostrando a ausência da proteína Rho íntegra na linhagem mutante. O nível de Rho em cada fase do ciclo celular de Caulobacter foi determinado por ensaio de imunoprecipitação
- Imprenta:
- Publisher: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP
- Publisher place: São Paulo
- Date published: 2002
- Source:
- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Congresso Instituto Ciências Biomédicas, IV
-
ABNT
ITALIANI, V C S e MARQUES, Marilis do Valle. Expressão e purificação do fator de terminação de transcrição RHO de Caulobacter crescentus. 2002, Anais.. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP, 2002. . Acesso em: 23 abr. 2024. -
APA
Italiani, V. C. S., & Marques, M. do V. (2002). Expressão e purificação do fator de terminação de transcrição RHO de Caulobacter crescentus. In Resumos. São Paulo: Comissão de Cultura e Extensão Universitária do ICB/USP. -
NLM
Italiani VCS, Marques M do V. Expressão e purificação do fator de terminação de transcrição RHO de Caulobacter crescentus. Resumos. 2002 ;[citado 2024 abr. 23 ] -
Vancouver
Italiani VCS, Marques M do V. Expressão e purificação do fator de terminação de transcrição RHO de Caulobacter crescentus. Resumos. 2002 ;[citado 2024 abr. 23 ] - Estudo da participação da proteína Rho na regulação do estresse oxidativo mediado por KatG em Caulobacter crescentus
- Estudo da participação da proteína rho na regulação do estresse oxidativo mediado por KatG em Caulobacter crescentus
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