Ver registro no DEDALUS
Exportar registro bibliográfico

Caracterização de três aminopeptidases intestinais de Stomoxys calcitrans (Diptera: Muscidae) (2003)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: GONZALEZ, LUIS CARLOS ALEXANDER - IB
  • USP Schools: IB
  • Sigla do Departamento: BIF
  • Subjects: STOMOXYS; DIPTERA; ENZIMOLOGIA; DIGESTÃO ANIMAL
  • Language: Português
  • Abstract: Um único tratamento de membranas intestinais de Stomoxys calcitrans com papaína é capaz de remover 42'+OU-'5% (n=3) da proteína e apenas 18'+OU-'3% (n=4) da atividade de aminopeptidase presente inicialmente nas membranas. Quando o tratamento com papaína é realizado uma segunda vez, 59'+ou-'5% (n=3) da atividade enzimática é recuperada no novo sobrenadante, bem como 39'+ou='2% (n=3) da massa protéica. Obtém-se assim uma considerável melhora no enriquecimento da atividade de aminopeptidase, a qual passa a ser 3,53x em relação à preparação inicial de membrana. Três atividades de aminopeptidase foram isoladas através de cromatografia de troca iônica (High Q e Mono Q) e hidrofóbica (Phenyl Superose). Essas APs foram denominadas HQ1, PS1 e PS2. As inativações térmicas de HQ1 a '60 GRAUS'C e de PS1 e PS2 a '65 GRAUS' C são lineares e seguem cinética de segunda ordem aparente por um período de tempo equivalente a três meias vidas. Esses resultados reforçam a hipótese de que temos uma única atividade de AP em cada uma das preparações. Para o estudo da especificidade a diferentes substratos, as APs isoladas foram ensaiadas com diferentes substratos, em diferentes concentrações: Arg, Leu, Ala, Met, e Glu p-nitroanilidas. Nenhuma das três APs hidrolizou satisfatoriamente Glu p-nitroanilida. Utilizando-se os demias substratos, os valores de Km e Vmax foram determinados. HQ1, PS1 e PS2 apresentam ampla especificidade em relação aos substratos utilizados, embora essas três enzimasapresentem diferenças quanto ao aminoácido terminal preferencialmente hidrolizado. Por outro lado, utilizando hidroxamato de leucina (H-Leu) em diferentes concentrações, em ensaio de inibição de duas APs (PS1 e PS2) observamos um padrão de inibição competitivo linear simples. Esse mesmo padrão é observado quando utilizamos idroxamato de arginina (H-Arg). Os valores de Ki obtidos para duas formas de APs dependem do tipo de hidroxamato adicionado e não do substrato utilizado: valores semelhantes são obtidos para HQ1 ao empregarmos H-Leu como inibidor e Leu ou Arg pNA como substrato. Esses resultados indicam que as três aminopeptidases aqui estudadas hidrolizam Leu e Arg no mesmo sítio ativo. Finalmente, QH1, PS1 e PS2, foram incubadas na presença do agente quelante EDTA por diferentes períodos de tempo. Para as três aminopeptidases ocorreu uma perda de atividade enzimática de acordo com uma cinética aparente de primeira ordem. A taxa de inativação enzimática provocada pelo agente quelante é substancialmente diminuída quando adicionamos H-Leu ao meio de incubação, em concentrações 25x àquela do Ki. Presumivelmente, o H-Leu está protegendo o sítio ativo da enzima ao se ligar a ele, impedindo assim a remoção de íons metálicos pelo EDTA. Esses resultados indicam que as APs de Stomoxys calcitrans estudadas são metalo-enzimas
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 11.04.2003

  • How to cite
    A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas

    • ABNT

      GONZALEZ, Luis Carlos Alexander; JORDÃO, Beatriz Pacheco. Caracterização de três aminopeptidases intestinais de Stomoxys calcitrans (Diptera: Muscidae). 2003.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2003.
    • APA

      Gonzalez, L. C. A., & Jordão, B. P. (2003). Caracterização de três aminopeptidases intestinais de Stomoxys calcitrans (Diptera: Muscidae). Universidade de São Paulo, São Paulo.
    • NLM

      Gonzalez LCA, Jordão BP. Caracterização de três aminopeptidases intestinais de Stomoxys calcitrans (Diptera: Muscidae). 2003 ;
    • Vancouver

      Gonzalez LCA, Jordão BP. Caracterização de três aminopeptidases intestinais de Stomoxys calcitrans (Diptera: Muscidae). 2003 ;

    Últimas obras dos mesmos autores vinculados com a USP cadastradas na BDPI:

    Digital Library of Intellectual Production of Universidade de São Paulo     2012 - 2019