Influência da região "pest" na auto-ativação da caspase-7 humana (2003)
- Authors:
- Autor USP: BELIZARIO, JOSE ERNESTO - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: FARMACOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Objetivo: Caspases são aspártico-proteases envolvidas nas fases de iniciação e execução da apoptose. O processamento e ativação da forma inativa (zimógeno) é dependente da aproximação, oligomerização e auto-clivagem realizada pela forma zimógeno da enzima. Nosso objetivo é avaliar a influência de aminoácidos de uma região rica em prolina, glutamato/aspartato, serina, treonina, denominada região PEST, no mecanismo de clivagem e auto-ativação da caspase-7. Métodos e Resultados: A substituição dos aminoácidos S199 e P201 por alanina foi obtido pela técnica "overlap extension PCR". Bactérias E coli BL21 (pLys) foram transformadas com o plasmídeo pGEX-4T contendo gene de caspase-7 selvagem e o mutante. Após indução com IPTG, a expressão e atividade da caspase-7 foram acompanhadas através de eletroforese de proteína em gel de poliacrilamida e atividade proteolítica sobre o substrato fluorogênico z-DEVD-AMC, respectivamente.Esses experimentos mostraram que a forma mutante de caspase-7 (S199A/P201A) não sofre auto-ativação ao longo de 6 horas, diferentemente da forma selvagem da enzima (produto de 32 kDa) que se auto-ativa após duas horas de incubação (produtos de 20 e 12 kDa). Conclusões: A ausência da forma ativa (p20, p12) da caspase-7 mutante sugere que as mutações no PEST influenciam a clivagem e a ativação da caspase-7. O modelo de estudo em bactéria parece ser adequado para os estudos futuros visando esclarecer o papel da região PEST nomecanismo de auto-ativação da enzima
- Imprenta:
- Publisher: Federação de Sociedades de Biologia Experimental
- Publisher place: Curitiba, Paraná
- Date published: 2003
- Source:
- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Reunião Anual da Federação de Sociedades de Biologia Experimental, FeSBE
-
ABNT
ALVES, J. e GARAY, H. M. e BELIZÁRIO, Jose Ernesto. Influência da região "pest" na auto-ativação da caspase-7 humana. 2003, Anais.. Curitiba, Paraná: Federação de Sociedades de Biologia Experimental, 2003. . Acesso em: 26 abr. 2024. -
APA
Alves, J., Garay, H. M., & Belizário, J. E. (2003). Influência da região "pest" na auto-ativação da caspase-7 humana. In Resumos. Curitiba, Paraná: Federação de Sociedades de Biologia Experimental. -
NLM
Alves J, Garay HM, Belizário JE. Influência da região "pest" na auto-ativação da caspase-7 humana. Resumos. 2003 ;[citado 2024 abr. 26 ] -
Vancouver
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