Clones recombinantes retrotransformantes obtidos em linhagens de leveduras Saccharomyces cerevisiae transformadas com plasmídio bifuncional pGTy-Glico (2003)
- Authors:
- Autor USP: VICENTE, ELISABETE JOSE - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: MICROBIOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: O emprego da retrotransformação como veículo para inserção de informação genética nos cromossomos de Saccharomyces cerevisiae foi inicialmente proposto por BOEKE et al., 1985. Neste trabalho foi construído o vetor pGTy-Glico capaz de promover inserções de múltiplas cópias no genoma, através da retrotransposição, do cassete de expressão da glicoamilase de Aspergillus awamori de 3,6 Kb, composto pelo seu cDNA (2,0 Kb), sob a regulação do PPGK de S. cerevisiae, sem o seu terminador de transcrição (1,6 Kb)(GUERRA et al., 2002). O novo vetor construído foi empregado para retrotransformação genética de duas linhagens de S. cerevisiae de coleções de cultura de laboratório: 1784 (HERSKOWITZ, 1989) e GRF-167 (BOEKE et al., 1985). Inicialmente, em cada evento de transformação, foram obtidas colônias de leveduras transformantes (Ura(+), glicoamilase(+)).A partir destes transformantes, foram selecionadas, ao acaso, 100 colônias de cada linhagem, que foram submetidas a condições de cultivo nas quais a retrotransposição foi induzida em dois períodos de tempo diferentes. Estes procedimentos levaram à obtenção de 6 clones retrotransformantes distintos (Ura(-), glicoamilase(+)): 2 derivados da linhagem 1784 e 4 de GRF-167. A presença do cDNA da glicoamilase nas células retrotransformadas foi confirmada através da amplificação, por PCR. A reconfirmação de que o cDNA da glicoamilase havia sido inserido no DNA cromossômico dos clonesretotransformantes foi obtida pela análise do padrão de hibridização por "Southern-Blot" dos DNAs totais submetidos à corrida em "PFGE", empregando-se, como sonda, um fragmento interno deste cDNA
- Imprenta:
- Publisher: Comissão de Pesquisa do ICB/USP
- Publisher place: São Paulo
- Date published: 2003
- Source:
- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Congresso Instituto Ciências Biomédicas, IV
-
ABNT
GUERRA, Odanir Garcia e VICENTE, Elisabete José e FARIA, Juarez Braz de. Clones recombinantes retrotransformantes obtidos em linhagens de leveduras Saccharomyces cerevisiae transformadas com plasmídio bifuncional pGTy-Glico. 2003, Anais.. São Paulo: Comissão de Pesquisa do ICB/USP, 2003. . Acesso em: 18 abr. 2024. -
APA
Guerra, O. G., Vicente, E. J., & Faria, J. B. de. (2003). Clones recombinantes retrotransformantes obtidos em linhagens de leveduras Saccharomyces cerevisiae transformadas com plasmídio bifuncional pGTy-Glico. In Resumos. São Paulo: Comissão de Pesquisa do ICB/USP. -
NLM
Guerra OG, Vicente EJ, Faria JB de. Clones recombinantes retrotransformantes obtidos em linhagens de leveduras Saccharomyces cerevisiae transformadas com plasmídio bifuncional pGTy-Glico. Resumos. 2003 ;[citado 2024 abr. 18 ] -
Vancouver
Guerra OG, Vicente EJ, Faria JB de. Clones recombinantes retrotransformantes obtidos em linhagens de leveduras Saccharomyces cerevisiae transformadas com plasmídio bifuncional pGTy-Glico. Resumos. 2003 ;[citado 2024 abr. 18 ] - Clones recombinantes retrotransformantes obtidos em linhagens de leveduras Saccharomyces cerevisiae transformadas com plasmídio bifuncional PGTY-glico
- A novel system of genetic transformation allows multiple integrations of a desired gene in Saccharomyces cerevisiae chromosomes
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