Mecanismos sinalizadores de apoptose após UV em células de mamíferos (2003)
- Authors:
- Autor USP: CHIGANCAS, VANESSA - IB
- Unidade: IB
- Sigla do Departamento: BIO
- Subjects: BIOLOGIA CELULAR; APOPTOSE; RADIAÇÃO ULTRAVIOLETA; MAMÍFEROS
- Language: Português
- Abstract: A irradiação ultravioleta (UV-C, 254 nm) gera ma molécula de DNA lesões do tipo fotoprodutos, sendo os mais importantes os dímeros de pirimidina ciclobutano ("cyclobutane pyrimidine dimers" - CPDs) e os fotoprodutos 6-4 ("pyrimidone (6-4) pyrimidone photoproducts" - 6-4 PPs). Na verdade, CPDs são as lesões de maior importância biológica, uma vez que são geradas em maior quantidade (são gerados 3 CPDs:1 6-4 PPs) e reparadas muito mais lentamente do genoma de células de mamíferos quando comparadas com 6-4 PPs. Visando investigar o papel específico de lesões CPDs na indução de apoptose após irradiação UV em células de mamíferos, foi empregada durante este projeto de doutorado a ferramenta do fotorreparo heterólogo nestas células. Linhagens de células de mamíferos expressando uma enzima CPD-fotoliase de marsupial (gene phr), capaz de eliminar especificamente estas lesões utilizando energia da luz visível, foram estabelecidas. Deste modo, pudemos controlar a presença ou ausência destes fotoprodutos no genoma das células simplesmente pela exposição ou não destas células à luz após a irradiação UV. Nossos dados mostram que esta enzima heteróloga é capaz de atividade específica de fotorreparo de CPDs em células humanas e de roedores. Experimentos utilizando estas linhagens expressando a enzima CPD-fotoliase demonstraram que lesões CPDs são o primeiro sinal para a apoptose em células de mamíferos; a eliminação destas lesões pelo fotorreparo na presença de luzprevine drasticamente a indução deste tipo de morte. A participação de mecanismos que monitoram lesões do tipo fotoprodutos no DNA na indução de apoptose ocorre principalmente quando estes estão presentes na fita transcrita de genes ativos, sendo responsáveis pelo bloqueio da progressão de complexos de transcrição e sinalizando especificamente para a morte celular programada após UV. A participação da enzima poli (ADP)ribose polimerase (PARP) na indução de apoptose após UV em células de mamíferos também foi investigada, utilizando um inibidor específico chamado 3-aminobenzamida (3AB). PARP é uma enzima nuclear ativada pela presença de quebras no genoma e envolvida na inibição de síntese de RNA mensageiro a partir de genes contendo lesões e indução de morte por apoptose. Nossos experimentos com células mantidas na presença de 3AB, ou seja, com atividade de PARP inibida, revelam uma prevenção da apoptose e recuperação de síntese de RNA após UV em comparação com amostras não tratadas. Estes dados indicam que PARP participa da via de indução de apoptose após a detecção de fotoprodutos no genoma, atuando na inibição de transcrição pela presença destas lesões. Como última estratégia, trabalhamos com células primárias de pacientes xeroderma pigmentosum, uma síndrome humana hereditária conseqüente de nível reduzido ou ausente de reparo de lesões do tipo fotoprodutos. Utilizamos um vetor adenoviral carregando a enzima CPD-fotoliase demarsupial, agora fusionada com a proteína verde fluorescente (EGFP) como gene repórter (gene phr-EGFP). Observamos uma rápida e específica migração desta proteína de fusão para áreas irradiadas contendo lesões CPDs no núcleo das células. A proteína phr-EGFP co-localiza com o sinal fluorescente de anticorpos para lesões CPDs e enzimas de reparo, confirmando a especificidade desta resposta e a funcionalidade do fotorreparo heterólogo também nos fibroblastos destes pacientes. Uma cinética de fotorreparo in vivo foi realizada em diferentes linhagens, sendo verificado que o acesso desta enzima CPD-fotoliase a lesões CPDs em algumas condições experimentais é prejudicado pela presença de proteínas de reparo deficientes que também são responsáveis por acessar os mesmos sítios na célula. Acreditamos que o emprego desta fotoliase de marsupial em células de mamíferos foi extremamente informativo na investigação dos mecanismos celulares envolvidos na sinalização de uma morte celular ativa pela detecção de lesões CPDs no genoma
- Imprenta:
- Data da defesa: 19.08.2003
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ABNT
CHIGANÇAS, Vanessa. Mecanismos sinalizadores de apoptose após UV em células de mamíferos. 2003. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2003. . Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Chiganças, V. (2003). Mecanismos sinalizadores de apoptose após UV em células de mamíferos (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. -
NLM
Chiganças V. Mecanismos sinalizadores de apoptose após UV em células de mamíferos. 2003 ;[citado 2024 abr. 24 ] -
Vancouver
Chiganças V. Mecanismos sinalizadores de apoptose após UV em células de mamíferos. 2003 ;[citado 2024 abr. 24 ]
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