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Avaliação dos efeitos da radiação gama na expressão de genes reguladores da recombinação V(D)J de receptores de células T (2004)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: CARDOSO, RENATO SOUSA - FMRP
  • USP Schools: FMRP
  • Sigla do Departamento: RGE
  • Subjects: EXPRESSÃO GÊNICA; GENÉTICA
  • Language: Português
  • Abstract: A análise funcional do desenvolvimento de células T tornou-se possível após a padronização do método de timo fetal in vitro (FTOC) na qual a estrutura tridimensional do timo, que é muito importante para a sua maturação, é mantida. Uma vez que a radiação ionizante afeta o desenvolvimento das células T, o objetivo deste estudo foi avaliar se a radiação modula a recombinação V(D)J VB8. l-BDJ2. 1 no modelo FTOC e buscar genes candidatos a estarem envolvidos nesse processo. O timo fetal de Balb-c 13-15 pc foi cultivado por dois dias (d=2), mimetizando os dias 15-17 do desenvolvimento in vivo. O timo dos fetos l5pc foi cultivado também por 5 dias (d=5), imitando o 20º dia de desenvolvimento in vivo. Imediatamente após o estabelecimento da cultura os FTOCs foram irradiados com 4 Gy de raios gama. A morte celular foi analisada ao microscópio de epi-fluorescência para avaliar a viabilidade do FTOC. As freqüências de células apoptóticas e necróticas não mostraram alterações significativas. Um método semi-quantitativo baseado em PCR foi desenvolvido para se detectar e quantificar a recombinação entre VB8.1-BDJ2.1. A expressão diferencial de mRNA foi avaliada usando microarrays de cDNA em membranas de nylon, contendo um total de 9.216 seqüências gênicas. Verificou-se que a radiação ionizante não influenciou a emergência da recombinação V(D)J, mas foi capaz de aumentar a quantidade de segmento recombinado de DNA em 5dFTOC l5pc. A análise de padrões de expressãogênica por microarray mostrou que dentre as 9216 seqüências testadas foi possível detectar a presença de genes diferencialmente expressos para comparações pareadas entre os diferentes dias de desenvolvimento ou a resposta à radiação. Foi demonstrado que genes de diversas classes foram reprimidos nos estágios de desenvolvimento posteriores à emergência de recombinação V(D)J. Dentre estes podemos citar os que atuam em vias de sinalização (SOCs3,Ppp2r2a e Ppp2r5e), ... transcrição (Tcf20 e Tcfe2a) e controle de ciclo celular (Rbbp4 e DUSP2). Foi também demonstrado que a radiação ionizante modulou a expressão de muito genes. Os genes que tiveram a expressão aumentada em resposta à radiação são participantes de vários processos, tais como: apoptose (NFkb1), diferenciação (Socs 3), transcrição (Irf3), controle de ciclo celular (Myc, RAD9, CDC16, IGFbp4 e IGFbp7) e metabolismo de DNA/RNA (Hist 1hic, FancG, Dao1, Sfr7 Pot1, Chd4, Topo2a, Eif3s3 e Sfr1). A radiação levou a repressão de genes de controle de ciclo celular (CDKap1, Psmd8 e Rela), transcrição (Miz1, Strap, Papola, Srfs1 e Pot1) e transdução de sinal (Pak4, PDK2, Eifebp2 e Iggap1). A análise de agrupamento hierárquico foi capaz de detectar a presença de seis conjuntos de genes que foram agrupados segundo os perfis de expressão gênica. Os grupos 1 e 2 apontam genes (ADNP, pten e stat4) reprimidos em FTOCs que mimetizam o timo controle no 20º dia de desenvolvimento e os que mimetizam otimo irradiado no 17º dia de desenvolvimento. Os grupos 3 e 4 de co-expressão apontam genes com expressão aumentada em culturas irradiadas que simulam o 16º e 17º dia de desenvolvimento em comparação com culturas controles. Dentre outros genes que estão presentes destacam-se no grupo 3: nfyc, anxa1, jak3, Ick, il11ra2, il7r; e no grupo 4: Tcra, rp127a, rbbp7, fgrr1, sox4 e Artemis O grupo 5 aglomerou genes que apresentaram alta expressão em culturas irradiadas que simulavam o timo em seu 15º dia de desenvolvimento. Neste agrupamento destacam-se os genes: syk, rad51ap1, pold1, igfbp7, axl e birc5. No grupo 6 foi detectada a co-expressão de diversos genes efetores da recombinação V(D)J (XRCC4, RAG2, DNA PK-cs) com genes que atuam neste processo, mas que ainda não têm uma função atribuída dentro da cascata molecular (WRN, Il-7) e genes que já foram identificados como candidatos a atuarem no mecanismo de controle do rearranjo ... (Il2rb, Il2LR1 Il6). Em adição, também foram incluídos neste grupo genes que não haviam sido relacionados previamente ao processo de recombinação V(D)J. Destes genes destacam-se Satb1 e LR1 que apresentam potencial de atuarem no controle da acessibilidade do gene à maquinaria de recombinação e o gene cross link repair lb (homólogo de Ártemis) cujo potencial reside em abrir as estruturas de DNA em forma de grampo que são formadas durante o processo de recombinação. Concluindo, a evolução do mecanismo derecombinação V(D)J ocorre no sistema FTOC de forma similar ao desenvolvimento do timo in vivo. Apesar de a radiação não induzir alterações na emergência dos rearranjos, esta induziu um aumento significativo na recombinação VB8.1-BDJ2.1 V(D)J em 5dFTOC15pc. A análise de expressão gênica por microarrays demonstrou a co-expressão de vários genes envolvidos no mecanismo de recombinação V(D)J e possibilitou a identificação de novos genes candidatos a atuarem neste processo
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 02.04.2004

  • Exemplares físicos disponíveis nas Bibliotecas da USP
    BibliotecaCód. de barrasNúm. de chamada
    FMRP11200028454Cardoso, Renato Sousa
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    • ABNT

      CARDOSO, Renato Sousa; PASSOS, Geraldo Aleixo Silva. Avaliação dos efeitos da radiação gama na expressão de genes reguladores da recombinação V(D)J de receptores de células T. 2004.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2004.
    • APA

      Cardoso, R. S., & Passos, G. A. S. (2004). Avaliação dos efeitos da radiação gama na expressão de genes reguladores da recombinação V(D)J de receptores de células T. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Cardoso RS, Passos GAS. Avaliação dos efeitos da radiação gama na expressão de genes reguladores da recombinação V(D)J de receptores de células T. 2004 ;
    • Vancouver

      Cardoso RS, Passos GAS. Avaliação dos efeitos da radiação gama na expressão de genes reguladores da recombinação V(D)J de receptores de células T. 2004 ;