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Tese

Mobilização de Ca+2 para a resposta contrátil estimulada com fenilefrina e NH4Cl no músculo anococcígeo isolado de rato (2004)

  • Authors:
  • Autor USP: RESTINI, CAROLINA BARALDI ARAÚJO - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RFA
  • Subjects: FARMACOLOGIA MOLECULAR; FARMACOLOGIA
  • Language: Português
  • Abstract: As fontes de 'Ca POT. +2' podem ser de origem intracelular, extracelular ou ambas. As nossas hipóteses são que, no músculo anococcígeo de rato, a resposta ao agonista ''alfa' IND.1'-adrenérgico, fenilefrina e ao agente alcalinizante, N'H IND.4'CI ocorra tanto devido ao influxo de 'Ca POT. +2' , quanto à mobilização de 'Ca POT. +2' de organelas intracelulares, particularmente o retículo sarcoplasmático e a mitocôndria. Utilizamos as técnicas de medida de contração isométrica em preparações isoladas e medida da concentração de 'Ca POT. +2' citoplasmática em células isoladas, além de analisar a morfologia das células do músculo liso anococcígeo por microscopia eletrônica. Não observamos resposta à fenilefrina após incubação das preparações por 30 ou 15 min em ausência de 'Ca POT. +2' extracelular. Fenilefrina causou aumento da concentração citoplasmática de 'Ca POT. +2' em células isoladas do músculo anococcígeo. A curva concentração-efeito para 'Ca POT. +2' extracelular sob estimulação com a fenilefrina mostrou que a resposta contratil foi dependente da concentração do 'Ca POT. +2' externo e o efeito máximo foi obtido com 'Ca POT. +2' 1 mM, e o influxo de 'Ca POT. +2' pode ocorrer via canais sensíveis à nifedipina e SKF 96365. A fenilefrina promoveu contração através da interação com ambos os subtipos de receptor ''alfa' IND.1A' e ''alfa' IND.1B', sensíveis aos respectivos antagonistas 5-MU e CEC, que promoveram antagonismo do tipo competitivo. Parte destaresposta ocorre por mobilização de 'Ca POT. +2' de estoques intracelulares sensíveis ao 'IP IND.3'. Dentre os estudos da participação dos estoques intracelulares de 'Ca POT. +2' , a contração induzida com cafeína foi dependente de 'Ca POT. +2' extracelular, indicando que o tempo de incubação em meio externo livre de 'Ca POT. +2' , poderia causar depleção dos estoques intracelulares de 'Ca POT. +2' sensíveis à cafeína. Além disso, cafeína causou aumento da ... concentração citoplasmática de 'Ca POT. +2' em células isoladas. Não houve efeito contrátil aditivo entre a cafeína (30 mM) e a fenilefrina (0,1'mü') em meio zero-'Ca POT. +2' e em meio contendo 'Ca POT. +2' 2,5 mM, sugerindo que estas drogas mobilizam 'Ca POT. +2' do mesmo estoque intracelular. Mesmo ativando a proteína quinase-C (PKC) com forbol-éster não foi possível manter ou aumentar a resposta contrátil da fenilefrina quando administrada sobre a contração com cafeína, em meio contendo 'Ca POT. +2' 2,5 mM, provavelmente porque o 'Ca POT. +2' intracelular, necessário para a abertura dos canais de 'Ca POT. +2' na membrana plasmática pela PKC, foi depletado pela ação da cafeína. Porém forbol-éster potencializou a contração estimulada com cafeína. Além disso, mostramos que a cafeína, mas não a fenilefrina, pode agir liberando 'Ca POT. +2' de estoque intracelular sensível ao rianodine e por liberar 'Ca POT. +2' de estoque intracelular comum à fenilefrina, mas quando osreceptores para 'IP IND.3' estão bloqueados por 2-APB, a cafeína ativa apenas os estoques sensíveis ao rianodine. Estudos com CPA e SKF 96365 mostraram que o mecanismo de influxo capacitivo de 'Ca POT. +2' está participando na resposta contrátil induzida com fenilefrina no músculo anococcígeo isolado de rato. Verificamos que o re-armazenamento de 'Ca POT. +2' ocorre via 'Ca POT. +2' -ATPase sensível ao ácido ciclopiazônico (CPA), já que em presença deste inibidor da 'Ca POT. +2' -ATpase, observamos contração ao re-adicionar 'Ca POT. +2' . Por outro lado, em presença de 2-APB, não observamos contração ao re-adiconar'Ca POT. +2' , como havíamos observado em presença de CPA. Estes resultados demonstram que a mobilização de 'Ca POT. +2' pela fenilefrina para manutenção da sua resposta contrátil será compensada: se os estoques intracelulares de 'Ca POT. +2' estiverem depletados, a contração induzida com fenilefrina depende do ... influxo de 'Ca POT. +2' do meio extracelular; se não há como mobilizar 'Ca POT. +2' do meio extracelular, a resposta contrátil induzida com fenilefrina dependerá dos estoques intracelulares. Estudos sobre a mobilização de 'Ca POT. +2' estimulada com N'H IND.4'Cl mostraram que as contrações estimuladas com este agente N'H IND. 4'Cl foram maiores que a contração induzida com fenilefrina. Da mesma forma, o aumento de 'Ca POT. +2' citoplasmático é significativamente maior quando estimulada com N'H IND.4'Cl. O influxo de 'CaPOT. +2' ocorre por canais sensíveis ao SKF, mas não envolve ativação da proteína quinase-C ou mesmo canais para 'Ca POT. +2' do tipo-L, sensíveis ao verapamil. Estudamos a importância de 'Ca POT. +2' extracelular para a contração induzida com N'H IND.4'Cl.- A incubação das preparações por 20 min em meio zero-'Ca POT. +2' aboliu a resposta contrátil induzida com 10 mM de N'H IND.4'Cl e tempos menores reduziram esta resposta, indicando que o 'Ca POT. +2' extracelular é importante e/ou que o tempo de incubação meio zero-'Ca POT. +2' esteja depletando os estoques intracelulares de 'Ca POT. +2' sensíveis ao N'H IND.4'Cl. Neste sentido observamos que a resposta contrátil induzida por N'H IND.4'Cl não envolve a mobilização de 'Ca POT. +2' do retículo sarcoplasmático sensíveis ao CPA, tapsigargina ou rianodine. Estudos com a técnica de microscopia eletrônica, mostraram a presença de grandes quantidades de mitocôndrias nas células. Estudando a participação desta organela utilizamos o inibidor do gradiente eletroquímico de prótons mitocondrial, carbonil cianida p-(fluoro-metoxi)fenilhidrazona (FCCP) associado à oligomicina, inibidor da produção de ATP mitocondrial, FCCP mais oligomicina, promoveu contração per se, e esta reposta foi dependente do 'Ca POT. +2' extracelular. Além disso, existe um componente mitocondrial nas respostas contráteis induzidas por fenilefrina e N'H IND.4'Cl, ... uma vez que as contrações estimuladas com fenilefrina foramreduzidas em presença de FCCP e oligomicina em solução de Krebs normal e abolidas em meio zero-'Ca POT. +2'. Nosso trabalho nos permite concluir que fenilefrina, promove aumento da concentração citoplasmática de íons 'Ca POT. +2' que ocorre devido à ativação de receptores ''alfa' IND.1A' e ''alfa' IND.1B'-adrenérgicos, o que leva ao aumento da concentração citoplasmática de íons 'Ca POT. +2' , responsável pela ativação das proteínas contráteis e contração muscular. Parte da resposta contrátil da fenilefrina se deve ao influxo de 'Ca POT. +2' e parte à mobilização de 'Ca POT. +2' de estoques intracelulares. O influxo de 'Ca POT. +2' pode ocorrer através de canais para voltagem dependentes do tipo-L ou ainda via influxo capacitivo. Os estoques intracelulares parecem ser mais relevantes e envolvem o retículo sarcoplasmático (receptores para 'IP IND.3', mas não os receptores para rianodine). O composto alcalinizante, N'H IND.4'Cl promove aumento da concentração citoplasmática de íons 'Ca POT. +2' . Ambos, N'H IND.4'Cl e fenilefrina podem mobilizar 'Ca POT. +2' de fontes diferentes. Parte da resposta contrátil do N'H IND.4'Cl se deve ao influxo de 'Ca POT. +2' e parte à mobilização de 'Ca POT. +2' de estoques intracelulares. O influxo de 'Ca POT. +2' estimulado com N'H IND.4'Cl pode ocorrer, em parte, via influxo capacitivo. O retículo sarcoplasmático não participa, mas a mitocôndria participa, como estoque intracelular de 'Ca POT. +2'
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 28.05.2004
    • How to cite
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    • ABNT

      RESTINI, Carolina Baraldi Araujo. Mobilização de Ca+2 para a resposta contrátil estimulada com fenilefrina e NH4Cl no músculo anococcígeo isolado de rato. 2004. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2004. . Acesso em: 19 abr. 2024.

    • APA

      Restini, C. B. A. (2004). Mobilização de Ca+2 para a resposta contrátil estimulada com fenilefrina e NH4Cl no músculo anococcígeo isolado de rato (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

    • NLM

      Restini CBA. Mobilização de Ca+2 para a resposta contrátil estimulada com fenilefrina e NH4Cl no músculo anococcígeo isolado de rato. 2004 ;[citado 2024 abr. 19 ]

    • Vancouver

      Restini CBA. Mobilização de Ca+2 para a resposta contrátil estimulada com fenilefrina e NH4Cl no músculo anococcígeo isolado de rato. 2004 ;[citado 2024 abr. 19 ]

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