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Padronização da reação de Immuno-dot para detecção de Pet em sobrenadante de cultura de Escherichia coli enteroagregativa (2004)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: COSTA, ANDREA BERNARDES VILHENA - FCF
  • USP Schools: FCF
  • Sigla do Departamento: FBC
  • Subjects: TÉCNICAS E PROCEDIMENTOS DE LABORATÓRIO; TESTES IMUNOLÓGICOS; IMUNOTOXINAS; DIARREIA (DIAGNÓSTICO); ESCHERICHIA COLI (CARACTERÍSTICAS)
  • Language: Português
  • Abstract: Escherichia colí enteroagregativa (EAEC), destaca-se como um importante patógeno emergente causador de diarréia persistente em países em desenvolvimento e de diarréia aguda em países desenvolvidos. A grande heterogeneidade dos fatores de virulência caracteriza esta categoria, porém não foi estabelecido um marcador genético comum a todas as amostras de EAEC. O padrão de adesão agregativa (AA) em células HEp-2 e HeLa é a forma de caracterização e diagnóstico mais precisos desta categoria. Uma das toxinas envolvidas na patogênese é Plasmid-encoded toxin (Pet) pertencente à classe das proteínas autotransportadoras com características de uma serino protease denominada SPATEs. Iniciou-se este estudo com a determinação do padrão de adesão de 164 amostras EAEC, previamente caracterizadas como sonda pCVD432 ou sonda AA positiva. Assim, 141 (86´POR CENTO`) amostras, que apresentaram padrão de adesão agregativo, foram caracterizadas como EAEC. Face aos resultados obtidos, confirmou-se a baixa especificidade da sonda AA. A pesquisa do gene pet, por meio de ensaio de PCR, resultou na positividade de 12 (8,5´POR CENTO`) amostras. Prosseguiu-se esse estudo com a padronização da reação de immuno-dot. Utilizando-se 300 ´MICROLITROS` do sobrenadante bacteriano, soro policlonal anti-Pet e o conjugado nas diluições 1/50 e 1/2.500, respectivamente, resultados bastante reprodutíveis foram obtidos. O método foi mais sensível que a detecção do gene por PCR. Por esseensaio, detectou-se a toxina Pet em 16 (11,3´POR CENTO`) das 141 amostras EAEC. Nenhuma das amostras controle negativo foi reconhecida pelo soro anti-Pet, assim como as amostras de E. colí produtoras das mais diversas toxinas. Apesar da baixa prevalência de amostras de EAEC produtoras da toxina Pet, neste estudo padronizou-se um método rápido, sensível, específico e de baixo custo para pesquisa desta toxina mostrando o potencial diagnóstico deste ensaio para uso em ) inquéritos epidemiológicos, o que poderá permitir determinar o papel da Pet no desenvolvimento de diarréia aquosa
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 07.12.2004
  • Acesso online ao documento

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    Exemplares físicos disponíveis nas Bibliotecas da USP
    BibliotecaCód. de barrasNúm. de chamada
    CQ30100010417T 616.0795 C837p
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    • ABNT

      COSTA, Andréa Bernardes Vilhena; MARTINEZ, Marina Baquerizo. Padronização da reação de Immuno-dot para detecção de Pet em sobrenadante de cultura de Escherichia coli enteroagregativa. 2004.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2004. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-31082009-163535/ >.
    • APA

      Costa, A. B. V., & Martinez, M. B. (2004). Padronização da reação de Immuno-dot para detecção de Pet em sobrenadante de cultura de Escherichia coli enteroagregativa. Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-31082009-163535/
    • NLM

      Costa ABV, Martinez MB. Padronização da reação de Immuno-dot para detecção de Pet em sobrenadante de cultura de Escherichia coli enteroagregativa [Internet]. 2004 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-31082009-163535/
    • Vancouver

      Costa ABV, Martinez MB. Padronização da reação de Immuno-dot para detecção de Pet em sobrenadante de cultura de Escherichia coli enteroagregativa [Internet]. 2004 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/9/9136/tde-31082009-163535/

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