Ver registro no DEDALUS
Exportar registro bibliográfico

Caracterização físico-química e estrutural do SbKI, um inibidor de serinoproteases de sementes de barbatimão (Stryphnodendron barbatiman) (2004)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: NAKAHIRA, MARCEL - IFSC
  • USP Schools: IFSC
  • Sigla do Departamento: FFI
  • Subjects: PROTEÍNAS; SEMENTES
  • Language: Português
  • Abstract: Os inibidores de proteases desempenham nas plantas funções como: defesa contra ataque de predadores de sementes, regulação de enzimas endógenas e fontes de proteínas e aminoácidos. Muitos destes inibidores são utilizados em estudos bioquímicos, bem como no tratamento de patologias humanas como inflamação e câncer.Neste trabalho, um inibidor deserinoprotease, presente na semente de Stryphnodendron barbatinan (barbatimão), foi purificado, caracterizado e denominado SbKI. Sementes de barbatimão maduras foram trituradas, até a obtenção de uma farinha, e esta foi suspensa em PBS, pH 7,4 (1:5 m/v), sob agitação por 14 horas a 4oC. O extrato foi centrifugado, filtrado e tratado com PVPP, sendo denominado EB, o qual apresentou inibição da coagulação sangüínea e da atividade de algumas serinoproteases. O inibidor SbKI foi purificado utilizando-se três procedimentos cromatográficos: cromatografia de exclusão molecular (Superdex-75, 10/30), troca iônica (Mono-S HR, 5/5), ambas acopladas em um sistema ÄKTA Purifier e fase reversa (C-18, Waters 250 x 4,6mm) acoplada a um sistema HPLC. Em cada etapa de purificação a presença do inibidor foi monitorada pelos testes de atividade inibitória da tripsina e da coagulação, ambos in vitro. SDS-PAGE, sob condições redutoras, mostrou que o inibidor é formado por duas cadeias polipeptídicas (cadeia pesada e leve) unida por ligação dissulfeto. As cadeias foram separadas pela cromatografia de fase reversa após seremreduzidas e alquiladas. Suas seqüências N-terminais foram determinadas pela degradação de Edman, em seqüenciador automatizado, apresentando alta identidade sequencial com inibidores do tipo Kunitz de outras leguminosas. A determinação da massa molecular do inibidor e de suas cadeias isoladas, foram determinadas por espectroscopia de massa (LC/ESI-MS system) mostrando massas moleculares de 19.570Da, 15530Da e 4040Da, respectivamente. A espectroscopia de dicroísmo circular ) (CD) revelou que o inibidor é formado predominantemente por elementos ß e estruturas desordenadas. SbKI foi estável a variações de pHs (2-12) e temperaturas extremas e a temperatura de transição foi calculada em 73,3'GRAUS'C. A determinação das constantes de inibição ("K IND. I") foi realizada para as serinoproteases tripsina ("K IND.I" = 5,5 nM) e calicreína plasmática ("K IND.I" = 1,1 nM)
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 17.12.2004
  • Acesso online ao documento

    Online access or search this record in

    Exemplares físicos disponíveis nas Bibliotecas da USP
    BibliotecaCód. de barrasNúm. de chamada
    IFSC82001659Te1659
    How to cite
    A citação é gerada automaticamente e pode não estar totalmente de acordo com as normas

    • ABNT

      NAKAHIRA, Marcel; BELTRAMINI, Leila Maria. Caracterização físico-química e estrutural do SbKI, um inibidor de serinoproteases de sementes de barbatimão (Stryphnodendron barbatiman). 2004.Universidade de São Paulo, São Carlos, 2004. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-01042014-174549/pt-br.php >.
    • APA

      Nakahira, M., & Beltramini, L. M. (2004). Caracterização físico-química e estrutural do SbKI, um inibidor de serinoproteases de sementes de barbatimão (Stryphnodendron barbatiman). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-01042014-174549/pt-br.php
    • NLM

      Nakahira M, Beltramini LM. Caracterização físico-química e estrutural do SbKI, um inibidor de serinoproteases de sementes de barbatimão (Stryphnodendron barbatiman) [Internet]. 2004 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-01042014-174549/pt-br.php
    • Vancouver

      Nakahira M, Beltramini LM. Caracterização físico-química e estrutural do SbKI, um inibidor de serinoproteases de sementes de barbatimão (Stryphnodendron barbatiman) [Internet]. 2004 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-01042014-174549/pt-br.php

    Últimas obras dos mesmos autores vinculados com a USP cadastradas na BDPI: