Estudo da isoforma 4 do permutador Na+ / H+ em células T84: caracterização funcional e modulação pela enterotoxina termoestável de E.coli, STa (2005)
- Authors:
- Autor USP: GONZALEZ, ANA ROSA BELTRAN - ICB
- Unidade: ICB
- Sigla do Departamento: BMB
- Subjects: FISIOLOGIA; ENTEROTOXINAS; MICROSCOPIA DE FLUORESCÊNCIA
- Language: Português
- Abstract: No presente trabalho, identificamos as isoformas do permutador Na+/H+ em células T84, de colon humano, por técnicas funcionais e moleculares. O pH celular foi medido por microscopia de fluorescência usando o indicador BCECF. O ritmo de extrusão de íons H+ destas células (JH) foi de 3.68 mM/min, medido pela velocidade de recuperação do pH celular (pHi) após acidificação por pulso de amônia e pela sua capacidade tamponante. Usando o derivado do amiloride, HOE-694 25 M, que inibe as isoformas NHE1 e NHE2, ainda observamos um remanescente de JH de 43% do fluxo total, cuja natureza investigamos. O inibidor S2336 (1 M), bloqueador específico de NHE3, não teve efeito sobre o JH remanescente; em trabalho anterior tínhamos verificado por RT-PCR a ausência desta isoforma das células T84. A presença da isoforma NHE4 nestas células foi verificada pelas seguintes observações funcionais: JH foi abolido inteiramente por EIPA; substituindo NaCl por gluconato de K elevou-se o JH da fração remanescente, o que não ocorre com outras isoformas; a hipertonicidade do meio também estimulou o JH remanescente. Do ponto de vista molecular, evidência da presença de RNAm da isoforma NHE4 foi obtida por RT-PCR.Por outro lado, a presença de uma isoforma dependente de Cl- foi eliminada, já que em meio 0Cl-, JH se elevou em vez de ser reduzido. Medidas de volume celular mostraram que em meio 0 Cl- o volume destas células se reduziu, o que foi impedido na presença do bloqueador de canaisNPPB, indicando que o efeito de 0Cl- era devido a redução do volume celular, da mesma forma que a hipertonicidade. A enterotoxina estável à temperatura de E. coli (STa 0.25 M) é capaz de estimular secreção de Cl- em células intestinais. Mostramos que preincubação por 30 min com esta toxina reduziu a fração remanescente de JH de 73%. Este efeito foi abolido por H89 10-4M, um bloqueador da PKA. A concentração de AMPc celular medida por imunoensaio foi significantemente elevada após preincubação com Sta. Incubação com uma forma permeante de GMPc não teve este efeito. Em conclusão, células T84 de colon humano contém três isoformas do permutador Na+/H+, quais sejam, NHE1, NHE2 e NHE4, mas não a isoforma dependente de Cl-. Além disso, o JH devido a NHE4 foi significantemente reduzido por STa através da via de sinalização AMPc / PKA
- Imprenta:
- Data da defesa: 30.05.2005
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ABNT
BELTRÁN-GONZÁLEZ, Ana Rosa. Estudo da isoforma 4 do permutador Na+ / H+ em células T84: caracterização funcional e modulação pela enterotoxina termoestável de E.coli, STa. 2005. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2005. . Acesso em: 17 abr. 2024. -
APA
Beltrán-González, A. R. (2005). Estudo da isoforma 4 do permutador Na+ / H+ em células T84: caracterização funcional e modulação pela enterotoxina termoestável de E.coli, STa (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. -
NLM
Beltrán-González AR. Estudo da isoforma 4 do permutador Na+ / H+ em células T84: caracterização funcional e modulação pela enterotoxina termoestável de E.coli, STa. 2005 ;[citado 2024 abr. 17 ] -
Vancouver
Beltrán-González AR. Estudo da isoforma 4 do permutador Na+ / H+ em células T84: caracterização funcional e modulação pela enterotoxina termoestável de E.coli, STa. 2005 ;[citado 2024 abr. 17 ]
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