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Mutagênese biológica em Streptomyces avermitilis: aplicação do Transposon Tn 5424 para geração de mutantes na bactéria produtora de avermectina (2003)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: AIKAWA, MARCIA - ICB
  • USP Schools: ICB
  • Subjects: MICROBIOLOGIA; STREPTOCOCCUS; MUTAGÊNESE
  • Language: Português
  • Abstract: Diante dos avanços da tecnologia do DNA recombinante, a obtenção de mutantes para estudos genéticos, bioquímicos e fisiológicos tornaram-se cada vez mais freqüentes. A utilização da mutagênese clássica, pôr indução química ou física, apesar de fácil implementação, torna difícil a localização dos genes afetados. A mutagênese biológica, nesse sentido, pode facilitar a inserção de DNA exógeno em segmentos específicos do cromossomo, gerando mutantes com características peculiares de interesse. Em 1994 foi construído o transposon composto Tn 5424 (Irnish & Cullum). Ele alberga em sua região terminal duas seqüências de inserção do módulo IS466, sendo uma das inserções, correspondente apenas a porção final do IS, tendo como marcador genético de seleção, o gene de resistência a tioestrepton. Sua principal característica refere-se a estabilidade da inserção sem evidências de grandes rearranjos genéticos no DNA da bactéria hospedeira. Em Streptomyces avermitilis, produtor do antiparasitário avermectina, transformantes da linhagem selvagem (ATCC 31267) e da linhagem IPT-85 foram obtidos a freqüências de 1,3 x 101 transformantes/ g DNA e 6,5 x 101 transformantes/ g DNA. Já, a freqüência de transposição foi de cerca de 0,4% na população mutagenizada.) Mutantes morfológicos e com a produção de avermectina alterada foram isolados através desse novo sistema. Tn 5424 parece inserir-se aleatoriamente, em diferentes regiões no DNA de S. avermitilis, sem evidências de rearranjosgenéticos aparentes. Transposantes de S. avermitilis mantiveram ainda, a marca de resistência a tioestrepton a uma concentração de 100 g/mL em cultivos na ausência de pressão seletiva. Técnicas de PCR reverso da região flanqueadora do Tn 5424 geraram 5 produtos de amplificação (dois de 650pb; um de 600pb; e dois de 450pb). A clonagem desses produtos, permitirão o seqüenciamento da região cromossômica afetada pelo transposon em Streptomyces avermitilis e sua possível utilização como sítio alvo para inserção de genes distintos e expressão de novos produtos.
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 21.07.2003

  • Exemplares físicos disponíveis nas Bibliotecas da USP
    BibliotecaCód. de barrasNúm. de chamada
    ICB12100013988T-ICB BMM QW4 A291m 2003
    How to cite
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    • ABNT

      AIKAWA, Marcia; PADILLA, Gabriel. Mutagênese biológica em Streptomyces avermitilis: aplicação do Transposon Tn 5424 para geração de mutantes na bactéria produtora de avermectina. 2003.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2003.
    • APA

      Aikawa, M., & Padilla, G. (2003). Mutagênese biológica em Streptomyces avermitilis: aplicação do Transposon Tn 5424 para geração de mutantes na bactéria produtora de avermectina. Universidade de São Paulo, São Paulo.
    • NLM

      Aikawa M, Padilla G. Mutagênese biológica em Streptomyces avermitilis: aplicação do Transposon Tn 5424 para geração de mutantes na bactéria produtora de avermectina. 2003 ;
    • Vancouver

      Aikawa M, Padilla G. Mutagênese biológica em Streptomyces avermitilis: aplicação do Transposon Tn 5424 para geração de mutantes na bactéria produtora de avermectina. 2003 ;

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