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Contribuição para o estudo das enzimas formadoras de Angiotensina II do leito arterial mesentérico de rato (2005)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: MOYSES, MILENE KIYOTO - FMRP
  • USP Schools: FMRP
  • Sigla do Departamento: RBI
  • Subjects: IMUNOQUÍMICA
  • Language: Português
  • Abstract: O leito arterial mesentérico (LAM) isolado de rato é capaz de liberar, aparentemente sem estímulo externo, endo e exopeptidases para a solução de perfusão. Entre essas enzimas uma elastase-2 foi descrita como a principal enzima formadora de Angiotensina (Ang) II nesse leito. No presente trabalho verificamos a existência de outra serino protease conversora de Ang I, que é responsável por aproximadamente 25% da Ang II formada pelo perfusato do LAM de rato. Propriedades bioquímicas e enzimológicas dessa enzima indicam que ela possui alguns aspectos em comum com quimases e elastases-2, como por exemplo, a inibição por quimostatina, Ac-AAPL-CK e CH5450. Até o momento é difícil separar as contribuições das enzimas como elastase-2 e quimase nas vias de geração de Ang II independentes da ECA. Isso ocorre pelo fato de que substratos e inibidores considerados específicos e seletivos para quimase, ['Pro EXP. 11'-D-'Ala EXP. 12']-Ang I e CH-5450, respectivamente, interajem produtivamente também com a elastase-2 do LAM de rato. A síntese de substratos e inibidores específicos para a elastase-2 é importante para o estudo da participação específica dessa enzima e de outras na conversão de Ang I no LAM de rato e em outros leitos vasculares. No presente trabalho foram sintetizados diversos substratos peptídicos, estruturalmente relacionados com a Ang I, incluindo análogos truncados na porção aminoterminal com a extremidade carboxiterminal livre ou amidada; peptídeosfluorescentes apagados; e substratos fluorogênicos. Utilizando-se os substratos sintéticos verificamos que a enzima elastase-2 do LAM de rato, apesar de apresentar uma especificidade ampla por diferentes substratos, não hidrolisou qualquer peptídeo que contivesse a ligação Phe- His, como aquela hidrolisada na Ang I. O estudo da ação da elastase-2 sobre as duas séries de peptídeos contendo a estrutura da Ang I truncada revelou a importância da seqüência IIe-His-Pro-Phe na interação enzima- substrato, além de indicar ausência de interações eletrostáticas importantes do resíduo carboxiterminal do substrato com a elastase-2. O substrato Ang I- amidado, um análogo isoestérico da Ang I desprovido da carga negativa terminal, foi hidrolisado pela enzima elastase-2 do LAM de rato com um 'K IND. m' de 111 'micro' M e 'K IND. cat' de 1724 'min EXP. 1', indicando uma eficiência catalítica de 15,5 'micro''M EXP. 1' 'min EXP. 1'. Além disso, esse peptídeo também apresentou atividade contrátil em preparação de anéis de carótida isolada de rato. Para estudos funcionais e enzimológicos tentamos produzir a elastase-2 do LAM de rato recombinante, através da sua expressão como pré-pró-enzima, pró-enzima ou na forma madura, em bactérias E. coli BL21(DE3) Codon Plus ou na linhagem de células HEK293T de mamíferos. Apesar de trabalhos anteriores terem relatado a expressão da enzima elastase-2 pancreática de rato, no presente trabalho não verificamos apresença da proteína elastase-2 do LAM de rato recombinante, nos meios de cultura ou extratos celulares, através de medidas da atividade ou SDS-PAGE e imunotransferência.
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 29.06.2005

  • How to cite
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    • ABNT

      MOYSÉS, Milene Kiyoto; OLIVEIRA, Eduardo Brandt. Contribuição para o estudo das enzimas formadoras de Angiotensina II do leito arterial mesentérico de rato. 2005.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2005.
    • APA

      Moysés, M. K., & Oliveira, E. B. (2005). Contribuição para o estudo das enzimas formadoras de Angiotensina II do leito arterial mesentérico de rato. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Moysés MK, Oliveira EB. Contribuição para o estudo das enzimas formadoras de Angiotensina II do leito arterial mesentérico de rato. 2005 ;
    • Vancouver

      Moysés MK, Oliveira EB. Contribuição para o estudo das enzimas formadoras de Angiotensina II do leito arterial mesentérico de rato. 2005 ;