Caracterização funcional e estrutural de uma metaloprotease hemorrágica isolada da peçonha de Bothrops jararacussu (2005)
- Authors:
- Autor USP: MAZZI, MAURICIO VENTURA - FCFRP
- Unidade: FCFRP
- Subjects: SERPENTES; VENENOS DE ORIGEM ANIMAL; TOXICOLOGIA
- Language: Português
- Abstract: Neste trabalho descrevemos o isolamento, a caracterização funcional e estrutural de uma metaloprotease hemorrágica, denominada BjussuMP-I. A proteína foi isolada da peçonha de Bothrops jararacussu por combinação de dois passos cromatográficos, utilizando filtração molecular em Sephacryl S-200, equilibrada em tampão Tris-HCI (0,01 M, pH 7,0) seguida de cromatografia de interação hidrofóbica em Phenyl-Sepharose CL-4B, equilibrada em tampão Tris-HCI (0,01 M, pH 7,6 mais NaCl 4 M) e eluída com gradiente de NaCI (4-0 M) a '25 GRAUS C' no mesmo tampão. BjussuMP-I é uma proteína com massa molecular de 60 kDa e pI 'APROXIMADAMENTE IGUAL A' 5,6, a qual induziu hemorragia após injeção intradérmica em camundongos, com uma dose hemorrágica mínima (DHM) de 4,5 'micro'g. A atividade hemorrágica da BjussuMP-I foi totalmente inibida após incubação com um agente quelante (EDTA), confirmando a dependência de metal da enzima para esse efeito. BjussuMP-I possui atividade proteolítica sobre a caseína e fibrinogênio e nenhum efeito sobre a gelatina. Por outro lado, demonstrou alta especificidade pela cadeia 'alfa' do fibrinogênio enquanto que a cadeia 'beta' somente foi hidrolisada na presença de altas concentrações da metaloprotease. A protease foi ativa sobre o fibrinogênio em pH neutro e alcalino e inativada a '75 GRAUS C'. A dependência de metal da enzima foi demonstrada pela inibição exercida por EDTA, EGTA e 1,10 fenantrolina. Verificou-se uma inibição parcial pelo'beta'-mercaptoetanol e PMSF, enquanto que leupeptina e aprotinina não afetaram a atividade fibrinogenolítica. A enzima foi ativada na presença de íons 'Ca POT.++' e 'Mg POT.++', sendo inibida por 'Mn POT.++', 'Fe POT.++', 'Zn POT.++', 'Co POT.++' e 'Ni POT.++'. Além disso, baixas concentrações da enzima produziram lise no coágulo de fibrina. BjussuMP-I também demonstrou inibição da agregação plaquetária induzida por colágeno e ADP e atividade bactericida ) sobre Escherichia coli e Staphylococcus aureus. Verificou-se que as atividades hemorrágica e proteolítica da BjussuMP-I foram neutralizadas pelo diterpenóide clerodane (Bt-CD) de Bacharis trimera. Também se observou uma inibição total do efeito hemorrágico, utilizando o extrato aquoso de Pentaclethra macroloba (EPema). A enzima foi reconhecida por anticorpos antineuwiedase, com uma reação de identidade imunológica parcial. A seqüência completa do cDNA da BjussuMP-I com 1540 pb codificou para uma proteína de 547 resíduos de aminoácidos, que conservou os domínios comuns a metaloproteases hemorrágicas de alto peso molecular da classe PIII: (i) pré-pró-peptideo, (ii) metaloprotease, (iii) disintegrina-símile e (iv) domínio rico em cisteína.
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2005
- Data da defesa: 19.08.2005
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ABNT
MAZZI, Maurício Ventura. Caracterização funcional e estrutural de uma metaloprotease hemorrágica isolada da peçonha de Bothrops jararacussu. 2005. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2005. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-24052007-101842/. Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Mazzi, M. V. (2005). Caracterização funcional e estrutural de uma metaloprotease hemorrágica isolada da peçonha de Bothrops jararacussu (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-24052007-101842/ -
NLM
Mazzi MV. Caracterização funcional e estrutural de uma metaloprotease hemorrágica isolada da peçonha de Bothrops jararacussu [Internet]. 2005 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-24052007-101842/ -
Vancouver
Mazzi MV. Caracterização funcional e estrutural de uma metaloprotease hemorrágica isolada da peçonha de Bothrops jararacussu [Internet]. 2005 ;[citado 2024 abr. 24 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60134/tde-24052007-101842/
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