Método implementado para extração de DNA de Cryptosporidium sp. em amostras de fezes preservadas e potencial aplicação para a vigilância da criptosporidiose (2005)
- Authors:
- USP affiliated authors: MATTE, GLAVUR ROGERIO - FSP ; MATTE, MARIA HELENA - FSP
- Unidade: FSP
- Subjects: CRYPTOSPORIDIUM; VIGILÂNCIA; REAÇÃO EM CADEIA POR POLIMERASE; ELETROFORESE
- Language: Inglês
- Abstract: The protozoan parasite Cryptosporidium parvum has become recognised as important emerging humam pathogens. For molecular studies, most of the techniques to extract genomic DNA require the use of imported kits to concentrate, rupture the very resistant oocyst wall, and purify the DNA from the samples matrix. This study aims to develop a simple and rapid method to extract Cryptosporidium DNA from preserved faeces. Oocyts were concentrated from faecal specimens by flotation on sucrose gradient. Genomic DNA was prepared from purified oocysts by incubating in a lysis buffer containing 70 mM B-mercaptoethanol, digesting with proteinase K and extracting with phenol-chlorophorm-isoamyl. To test whether DNA was properly liberated from oocysts samples, PCR reactions were performed using a generic set of primer (AWA). To detect C. parvum, a one step PCR was assayed using a specific primer (LAX). To increase the sensitivity in the detection, nested-PCR assays were tested, using an outer primer (XIA) in the primary reaction. Thirty-two DNA samples were analysed from the standard calf, and eight samples from the three naturally infected calves. The overall results are: 78.12 per cent (25/32) positivity for Cryptosporidium sp. and 71,87 per cent (23/32) for C. parvum from the standard calf samples. For the naturally infected calves, the overall results are 50,0 per cent (4/8) for Cryptosporidium sp. and 62.5 per cent (5/8) for C. parvum. The use of Vistra Green forstaining agarose gels implemented the visualization of the amplicons. Theses results demonstrate that this simple method could be improved for routine laboratory work
- Imprenta:
- Source:
- Título do periódico: Revista Brasileira de Vigilancia Sanitaria
- ISSN: 1807-8923
- Volume/Número/Paginação/Ano: v. 1, n. 3, p. 208-214, jul.-set. 2005
-
ABNT
ALMEIDA, Therezinha Travassos Carvalho de et al. Método implementado para extração de DNA de Cryptosporidium sp. em amostras de fezes preservadas e potencial aplicação para a vigilância da criptosporidiose. Revista Brasileira de Vigilancia Sanitaria, v. 1, n. 3, p. 208-214, 2005Tradução . . Acesso em: 29 mar. 2024. -
APA
Almeida, T. T. C. de, Casimiro, A. M., Matté, G. R., & Matté, M. H. (2005). Método implementado para extração de DNA de Cryptosporidium sp. em amostras de fezes preservadas e potencial aplicação para a vigilância da criptosporidiose. Revista Brasileira de Vigilancia Sanitaria, 1( 3), 208-214. -
NLM
Almeida TTC de, Casimiro AM, Matté GR, Matté MH. Método implementado para extração de DNA de Cryptosporidium sp. em amostras de fezes preservadas e potencial aplicação para a vigilância da criptosporidiose. Revista Brasileira de Vigilancia Sanitaria. 2005 ; 1( 3): 208-214.[citado 2024 mar. 29 ] -
Vancouver
Almeida TTC de, Casimiro AM, Matté GR, Matté MH. Método implementado para extração de DNA de Cryptosporidium sp. em amostras de fezes preservadas e potencial aplicação para a vigilância da criptosporidiose. Revista Brasileira de Vigilancia Sanitaria. 2005 ; 1( 3): 208-214.[citado 2024 mar. 29 ] - Aplicação de métodos moleculares na triagem de isolados presuntivos de E. coli O157 em amostras de fezes de bovinos
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