Purificação e investigação das propriedades físico-químicas de inibidores de proteases extraídos de sementes de Acacia plumosa Lowe (2006)
- Authors:
- Autor USP: LOPES, JOSÉ LUIZ DE SOUZA - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FFI
- Subjects: CROMATOGRAFIA; PROTEÍNAS; BIOLOGIA MOLECULAR; ACÁCIA; BIOFÍSICA
- Language: Português
- Abstract: Sementes das plantas pertencentes à família Leguminosae são excelentes fontes de inibidores de proteases. O gênero Acacia é um dos membros mais importantes deste grupo. Neste trabalho, foram descritos novos inibidores de proteases das sementes de Acacia plumosa Lowe. A partir do extrato salino das sementes maduras, os inibidores foram purificados por cromatografia de exclusão molecular em coluna Superdex-75 (equilibrada e eluída com PBS) e cromatografia de troca iônica em coluna Mono-S, equilibrada e eluída com o tampão Acetato de Sódio 50 mM (pH 5.0) num gradiente linear de 'NA''CL' 0-0.5 M. Quatro frações (eluídas por volta de 0.1 8, 0.22, 0.33 e 0.37 M de 'NA''CL') apresentaram atividade anticoagulante e ação inibitória sobre serinoproteases, estas frações foram denominadas ApTIA, ApTIB, ApTIC e ApTID, respectivamente. Em condições nativas, a espectrometria de massas mostrou as massas moleculares de três deles (A, B e C): 19.709; 19.869 e 20.378 Dáltons, enquanto que em SDS-PAGE na presença de 'beta'-mercaptoethanol, foram observadas duas cadeias para cada um dos inibidores. A análise dos primeiros 10 resíduos de aminoácidos da região N-Terminal das duas cadeias das formas A, B, C revelou identidade com inibidores do tipo Kunitz, e também mostrou dois resíduos diferentes na ApTIC, em relação as formas A e B. Estes dados levam a interpretação de que estes inibidores são diferentes isoformas encontradas nesta semente. O espectro de dicroísmo circular foramcompatíveis com proteínas que majoritariamente apresentam elementos-'beta' e não-ordenados em sua estrutura, apresentando máximos positivos por volta de 230 nm e mínimos em 202 nm. Os três isoinibidores foram muito estáveis em pHs ácidos e alcalinos, e suas estruturas foram afetadas somente acima de '75 GRAUS'C. As constantes de associação (KA) e de dissociação('K IND.D') determinadas por SPR (num sistema BIACORE) com enzimas proteolíticas indicaram ) que a afinidade destes inibidores por tripsina foi até 20 vezes maior que para quimotripsina (tripsina: 'K IND.A' 2.57 x '10 POT.9''M POT.-1' e quimotripsina: 'K IND.A' 1.34 x '10 POT.8''M POT.-1'), e o complexo tripsina-inibidor mostrou maior estabilidade (tripsina: 'K IND.D' por volta de 0,5 nM e quimotripsina: 6 nM). Estes inibidores também apresentaram ação inibitória sobre o crescimento dos fungos Aspergillus niger,Thielaviopsis paradoxa, Colletotrichum sp P10 e Fusarium moniliforme, mostrando que provavelmente a inibição de suas serinoproteases possa ser um mecanismo de controle das suas proliferações
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2006
- Data da defesa: 24.03.2006
-
ABNT
LOPES, José Luiz de Souza. Purificação e investigação das propriedades físico-químicas de inibidores de proteases extraídos de sementes de Acacia plumosa Lowe. 2006. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2006. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-18092007-112855/. Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Lopes, J. L. de S. (2006). Purificação e investigação das propriedades físico-químicas de inibidores de proteases extraídos de sementes de Acacia plumosa Lowe (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-18092007-112855/ -
NLM
Lopes JL de S. Purificação e investigação das propriedades físico-químicas de inibidores de proteases extraídos de sementes de Acacia plumosa Lowe [Internet]. 2006 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-18092007-112855/ -
Vancouver
Lopes JL de S. Purificação e investigação das propriedades físico-químicas de inibidores de proteases extraídos de sementes de Acacia plumosa Lowe [Internet]. 2006 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-18092007-112855/ - Plantaricina 149 e análogos: atividade antimicrobiana, estudos estruturais e mecanismos de ação
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