Expressão gênica em Xanthomonas axonopodis pv. citri controlada por promotores induzidos pela planta hospedeira (2006)
- Authors:
- Autor USP: CARVALHO, FLÁVIA MARIA DE SOUZA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RGE
- Subjects: XANTHOMONAS; EXPRESSÃO GÊNICA; BIOTECNOLOGIA DE PLANTAS
- Language: Português
- Abstract: O cancro cítrico, causado pela bactéria Gram negativa Xanthomonas axonopodis pv. citri (Xac) é considerado uma das principais doenças da citricultura nacional e mundial, devido à susceptibilidade do hospedeiro e por não existirem métodos de controle eficientes. Dados da literatura relatam que alguns genes de bactérias fitopatogênicas possuem uma seqüência consenso de nucleotídeos (TTCGC...N15...TTCGC) denominada "PlP box" ou "plant-inducible-promoter box", localizada na região promotora e responsável pela ativação da expressão de fatores de patogenicidade e virulência quando o patógeno entra em contato com a planta hospedeira. O objetivo deste trabalho foi mapear e investigar no genoma da Xac a expressão de genes contendo seqüências do tipo "PlP box", a 5' da ORF ou internamente na região codificadora, através da técnica de macroarranjo. Com auxílio de uma ferramenta de bioinformática (script PERL), 208 seqüências consenso para o elemento cis-regulatório "PlP box" foram mapeados no genoma da Xac, e clones contendo seqüências codificadoras associadas aos promotores do tipo "PlP box" foram recuperados do banco de clones gerado pelo projeto de seqüenciamento da bactéria e validados por seqüenciamento. Os DNAs plasmidiais representando cada clone foram preparados e imobilizados em membranas de náilon (macroarranjo), as quais foram hibridadas com sondas de cDNAs marcadas com [a³³P] dCTP e obtidas a partir de RNA total extraído da bactéria em estádio não infectante(cultivada em meio de cultura Caldo Nutriente meio CN) e da bactéria infectante (cultivada por 12 horas ou 20 horas em meio XAM1 indutor de patogenicidade e virulência, ou coletada por exsudação 3 dias ou 5dias após inoculação em folhas de laranjeira). A análise da expressão dos genes contendo promotores "PIP box" putativos revelou 67 genes diferencialmente expressos quando a bactéria teve o seu programa de infecção disparado (indução "in" vitro" ou "in vivo"). A validação dos resultados de macroarranjo foi realizada para alguns dos genes por meio de RT-PCR semi-quantitativo e a funcionalidade da seqüência "PIP box" para alguns promotores foi demonstrada através do gene repórter GUS. Os genes com expressão diferencial foram classificados segundo a função biológica das respectivas proteínas codificadas e estão envolvidos em processos tão distintos quanto sistema de secreção tipo lIl, metabolismo de membrana e parede celular, sistema de captação de ferro, metabolismo de açúcares e degradação da parede vegetal, transdução de sinais, metabolismo de flagelo, formação de biofilme e adesividade, metabolismo de ácidos nucléicos, transportadores de membrana, metabolismo energético e resposta a estresse ambiental. O possível papel destas modificações para a interação planta-patógeno e a instalação do cancro cítrico é discutida
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2006
- Data da defesa: 21.08.2006
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ABNT
CARVALHO, Flávia Maria de Souza. Expressão gênica em Xanthomonas axonopodis pv. citri controlada por promotores induzidos pela planta hospedeira. 2006. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2006. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-19102006-152429/. Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Carvalho, F. M. de S. (2006). Expressão gênica em Xanthomonas axonopodis pv. citri controlada por promotores induzidos pela planta hospedeira (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-19102006-152429/ -
NLM
Carvalho FM de S. Expressão gênica em Xanthomonas axonopodis pv. citri controlada por promotores induzidos pela planta hospedeira [Internet]. 2006 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-19102006-152429/ -
Vancouver
Carvalho FM de S. Expressão gênica em Xanthomonas axonopodis pv. citri controlada por promotores induzidos pela planta hospedeira [Internet]. 2006 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17135/tde-19102006-152429/
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