Regulação da expressão gênica pelo Pi e pH em fungos filamentosos (2006)
- Authors:
- Autor USP: ONO, CARLOS JOSE - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBI
- Subjects: FUNGOS; EXPRESSÃO GÊNICA; BIOQUÍMICA
- Language: Português
- Abstract: Os fungos filamentosos Aspergillus nidlllans e Neurospora crassa são organismos nutricionalmente versáteis e podem crescer em várias condições, incluindo variações extremas de pH. Essa versatilidade implica na regulação do pH homeostático, onde essas variações não são amplas, e no monitoramento do pH extracelular, para que sejam sintetizadas permeases e secretadas enzimas que efetivamente funcionem no meio externo, como por exemplo, a secreção de fosfatase ácida em meio ácido e fosfatase alcalina em meio alcalino. Além disso, o fungo A. nidlllans está entre os organismos cujo sistema de monitoramento e resposta ao pH está sendo caracterizado. Nesse fungo é conhecida a existência de genes alcalinos (expressados preferencialmente em pH alcalino e cuja transcrição não seria ativada em pH ácido) e de genes ácidos (expressados preferencialmente em pH ácido e cuja transcrição não seria ativada em pH alcalino). A via de sinalização pelo pacC media muitos eventos metabólicos envolvidos no sensoriamento do pH extracelular, como em A. nidlllans, sendo consagrado que o mesmo dirige a resposta em pHs neutro a alcalino. O gene pacC codifica para um fator de transcrição tipo zinc-finger cuja transcrição é auto-induzida em meio de cultivo com pH alcalino. Os genes paI (A, B, C, F, H e I) são membros putativos de uma cascata de sinalização, com função presumida de promover a ativação proteolítica de PacC. Portanto, o modelo vigente detennina que a versão íntegra de PacC ('pacC IND.72') é ativada em pH alcalino através de dois passos proteolíticos, nos quais remove-se o domínio C-terminal. A conversão de 'pacC IND. 72' a 'PacC IND. 53' é PalB e pH-dependentes, enquanto a conversão de de 'PacC IND. 53' a 'PacC IND.27' é pH independente. Assume-se que a fonna processada 'PacC IND. 27' seja, talvez, a forma funcional de PacC em pH alcalino. Este modelo implica que a inativação de algum dos genes pal resultaria a uma expressão aumentada de 'PacC IND. 72' independente do pH extracelular. Para testar esta hipótese expressamos parte da PacC (contendo a região de zinc-finger) em E.coli, sendo purificada em coluna de imunoafinidade e aplicada em coelho para obtenção de anticorpos policlonais. Anti-PacC foi purificado e ligado quimicamente a uma resina sepharose hidrazida e utilizada para sua purificação por cromatografia de imunoafinidade. Os resultados mostram que o processamento proteotítico de PacC ocorre no mutante paiB7 em condição ácida de crescimento, o mesmo ocorrendo em pH alcalino, onde a versão integra deveria ser abundante. O gene nllc-l foi inativado por RIP, sendo estudado sua expressão diferencial através de uma Biblioteca Subtrativa, observando-se que este gene está relacionado com diferentes processos metabólicos. Mostramos que o gene nllc-l também pode estar envolvido na expressão da proteína "heat-shock" de choque térmico codificada pelo gene hsp70. Esta proteína chaperone facilita a formação da confonnaçãonativa de proteínas transportadas através do retÍculo endoplasmático, com concomitante glicosilações específicas dessas proteínas destinadas para a secreção, por exemplo, as fosfatases Pi-repressíveis
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2006
- Data da defesa: 30.10.2006
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ABNT
ONO, Carlos José. Regulação da expressão gênica pelo Pi e pH em fungos filamentosos. 2006. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2006. . Acesso em: 25 abr. 2024. -
APA
Ono, C. J. (2006). Regulação da expressão gênica pelo Pi e pH em fungos filamentosos (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Ono CJ. Regulação da expressão gênica pelo Pi e pH em fungos filamentosos. 2006 ;[citado 2024 abr. 25 ] -
Vancouver
Ono CJ. Regulação da expressão gênica pelo Pi e pH em fungos filamentosos. 2006 ;[citado 2024 abr. 25 ]
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