Expressão do gene ARR-A5 em resposta a citocinina em tomate (2006)
- Authors:
- Autor USP: PERES, LAZARO EUSTAQUIO PEREIRA - ESALQ
- Unidade: ESALQ
- Subjects: TOMATE; MUTAÇÃO VEGETAL
- Language: Português
- Abstract: 1. Objetivos: A regulação hormonal em plantas é um processo complexo, evidenciada por interações entre distintos hormônios no controle dos vários eventos fisiológicos. As citocininas participam de diversos aspectos do desenvolvimento vegetal, como a germinação de sementes, diferenciação de cloroplastos, desenvolvimento de gemas laterais, indução de gema adventícia, dominância apical, dentre outros. A via de sinalização de citocininas inicia-se com um receptor específico do tipo Histidina Quinase (CRE1), uma proteína de transferência de fosfato (AHP) e os fatores de transcrição do tipo RR (proteínas reguladoras de resposta ARR-A e ARR-B). Após a percepção do sinal citocinina pelo receptor, esse é auto-fosforilado,iniciando uma seqüência de etapas via proteína AHP, que modula a atividade das proteínas ARR. As ARR-B, localizadas no núcleo, interagem fisicamente com as AHP e regulam a atividade de genes ativados por citocininas, incluindo as proteínas ARR-A. A proteína ARRA5 é expressa principalmente no meristema de raiz. O mutante brt, disponível no banco TGRC, foi caracterizado fisiologicamente, apresentando alterações pleiotrópicas que estão associadas com a diminuição na sensibilidade à citocinina [1]. Para melhor caracterizar este mutante, o trabalho objetivou avaliar a expressão da proteína ARR-A5 em raízes na presença de citocinina exógena.2. Material e Métodos: Utilizou-se tomateiro 'Micro-tom' e o mutante brt introgredido em 'Micro-tom'. Para cadaexperimento, 120 sementes de cada genótipo foram germinadas em 4 frascos contendo meio MS. Os frascos foram incubados por 10 dias em fotoperíodo de 16 h. As plântulas de cada frasco foram individualizadas e transferidas para gerbox contendo água ou 5 M BAP (citocinina). As amostras foram incubadas por diferentes tempos (2h e 4h). As raízes foram coletadas e guardadas à -70ºC. O RNA foi extraído com Trizol., e sua qualidade foi avaliada por eletroforese em gel de agarose e quantificado em espectrofotômetro. Os oligonucleotídeos foram desenhados no programa PRIMER3. Para a curva de eficiência dos dois genes foi preparado um pool de RNA de todas as amostras em diluições de até 1000 vezes. Sintetizou-se o cDNA utilizando Improm (Promega). A seguir, o cDNA foi diluído 100 vezes e 2 l de cada tempo foi analisado por RT-PCR quantitativo em triplicata A reação de RT-qPCR continha iniciadores na concentração de 0,5 pmoles em volume final de 10 L com o mix Syber green UDG qPCR (Invitrogen).Como normalizador foi utilizado o gene da GAPDH. A quantificação relativa da expressão do gene foi realizada segundo Pffaffl [2]. 3. Resultados e Discussão: O RNA obtido de raízes de tomateiro foi de boa qualidade. A eficiência da reação de amplificação foi similar entre os genes e acima de 1,8, com valor de R2 > 0,98. A análise da expressão do gene RRA-5 em relação ao gene da GAPDH, revelou um aumento de expressão na presença do hormônio citocinina após 2 horas de incubação,sofrendo uma queda após 4 horas. Os dados também mostraram que o mutante brt responde menos ao hormônio, pois apresentou valores menores de expressão relativa em todos os pontos analisados. 4. Conclusões: Os resultados indicam que o mutante brt apresenta uma menor sensibilidade ao hormônio citocinina, já que houve uma diminuição na indução da expressão do gene ARR-A5, corroborando os dados fisiológicos obtidos anteriormente [1].
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- Título do periódico: Ciências Biológicas e da Saúde; resumos
- Conference titles: Simpósio Internacional de Iniciação Científica da Universidade de São Paulo
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ABNT
Expressão do gene ARR-A5 em resposta a citocinina em tomate. 2006, Anais.. São Paulo: USP, 2006. . Acesso em: 23 abr. 2024. -
APA
Expressão do gene ARR-A5 em resposta a citocinina em tomate. (2006). Expressão do gene ARR-A5 em resposta a citocinina em tomate. In Ciências Biológicas e da Saúde; resumos. São Paulo: USP. -
NLM
Expressão do gene ARR-A5 em resposta a citocinina em tomate. Ciências Biológicas e da Saúde; resumos. 2006 ;[citado 2024 abr. 23 ] -
Vancouver
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