Investigação do sistema pectinolítico produzido pelo fungo paecilomyces variotii: produção, purificação e caracterização bioquímica de uma Poligalacturonase (2008)
- Authors:
- Autor USP: DAMASIO, ANDRÉ RICARDO DE LIMA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBI
- Subjects: FUNGOS (MICROBIOLOGIA;FISIOLOGIA); ENZIMAS PECTINOLÍTICAS (ESTUDO)
- Language: Português
- Abstract: As enzimas pectinolíticas são produzidas principalmente por fungos filamentosos, podendo ser classificadas em esterases (pectinesterase) despolimerases (poligalacturonases e liases), sendo que apresentam um potencial de uso biotecnológico na extração de azeite de oliva, recuperação de óleos da casca de frutas, clarificação de sucos de fruta, fabricação do vinho e indústria textil. O objetivo inicial deste trabalho foi selecionar fungos bons produtores de pectinases, isolados de amostras de solo ou plantas de várias regiões do Estado de São Paulo, de acordo com o Programa BIOTA, destacando-se Paecilomyces variotii. As condições para produção enzimática foram determinadas, utilizando o meio de cultivo Czapeck, pH 7,0, suplementado com pectina cítrica 1,25% como fonte de carbono, inoculado com 10 POT.5 esporos, a 30 GRAUSC, sem agitação, por 5 dias. O fungo se desenvolveu em uma ampla faixa de pH (3-8), concentração osmótica (0-2,5% NaCI), e temperatura de até 40GRAUSC, o que o caracteriza como um microrganismo tolerante a ambientes extremos. O processo de purificação foi realizado através de cromatografia de troca iônica (DEAE-Fractogel) e cromatografia de filtração (Sephadex G-100), onde obteve-se uma única forma de poligalacturonase, com fator de purificação de vezes e 47,2% de recuperação. o grau de homogeneidade foi verificado em PAGE 12% e o caráter pectinolítico foi confirmado após revelação dos géis, polimerizados com polipectato de sódio, com vermelho derutênio. A característica de exo-poligalacturonase determinada através de cromatografia em camada delgada. A exo-poligalacturonase apresentou massa molecular de 79,4 kDa, com pH e temperatura ótima de reação de 4,0 e 65GRAUSC, A enzima foi estável até 50GRAUSC a uma faixa de pH de 3,0-6,0, por até 24 horas. O ponto isoelétrico e o conteúdo de carboidratos foram de 4,37 e 25%, assim como, os valores aparentes de Km e V IND.máx foram de 1,84 mg/mL e 432 mümols açúcares redutores/min/mg prot Os ensaios enzimáticos na presença de diversos íons metálicos resultaram na redução da atividade enzimática na presença dos compostos AgNO IND.3 (1 e 10mM), Fe IND.2SO IND.4.4H IND.2O (1 mM), ZnCI IND.2 (10mM), AICI IND.3 (10mM). Na presença de solventes orgânicos, miscíveis ou imiscíveis em água, a atividade enzimática relativa manteve-se sempre acima de 70%. A exo-poligalacturonase também manteve 89,6% de sua atividade na presença de NaCI 0,5M no meio reacional. Através de análises em Western Blotting foi possível determinar homologia entre as poligalacturonases produzidas por Paecilomyces variotii e Aspergillus niveus
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2008
- Data da defesa: 29.02.2008
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ABNT
DAMÁSIO, André Ricardo de Lima. Investigação do sistema pectinolítico produzido pelo fungo paecilomyces variotii: produção, purificação e caracterização bioquímica de uma Poligalacturonase. 2008. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2008. . Acesso em: 24 abr. 2024. -
APA
Damásio, A. R. de L. (2008). Investigação do sistema pectinolítico produzido pelo fungo paecilomyces variotii: produção, purificação e caracterização bioquímica de uma Poligalacturonase (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Damásio AR de L. Investigação do sistema pectinolítico produzido pelo fungo paecilomyces variotii: produção, purificação e caracterização bioquímica de uma Poligalacturonase. 2008 ;[citado 2024 abr. 24 ] -
Vancouver
Damásio AR de L. Investigação do sistema pectinolítico produzido pelo fungo paecilomyces variotii: produção, purificação e caracterização bioquímica de uma Poligalacturonase. 2008 ;[citado 2024 abr. 24 ]
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