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Avaliação do desenvolvimento após a criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro (2008)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: NICACIO, ALESSANDRA CORALLO - FMVZ
  • USP Schools: FMVZ
  • Sigla do Departamento: VRA
  • Subjects: CRIOPRESERVAÇÃO ANIMAL; FERTILIZAÇÃO "IN VITRO" ANIMAL; EMBRIÃO DE ANIMAL; EXPRESSÃO GÊNICA; BOVINOS
  • Language: Português
  • Abstract: A ineficiência dos protocolos de criopreservação limita o uso em larga escala da produção in vitro de embriões bovinos. O objetivo deste trabalho foi identificar os danos causados pela criopreservação e pelo cultivo embrionário de embriões bovinos produzidos in vitro após a descongelação, avaliando a morfologia, a expressão gênica e o desenvolvimento in vitro antes e após a criopreservação. Complexos cummulusoócitos foram maturados, fecundados e cultivados in vitro. Blastocistos expandidos (n=600) obtidos entre os dias 7 e 9 de cultivo (fecundação D0) foram submetidos a congelação controlada (grupo controlado: 10% de etileno glicol (EG) por 10 minutos, 1,2oC por minuto), congelação rápida (grupo rápido: 10% de EG por 10 minutos , 20% de EG + 20% de Glicerol (Gli) por 30 segundos) ou vitrificação (grupo vitrificação: 10% de EG por 10 minutos, 25% EG + 25% Gli por 30 segundos). Os embriões do grupo controle não foram expostos a crioprotetores e nem a protocolos de criopreservação, sendo avaliado o índice de eclosão 12 dias após a fecundação (46,09%). As palhetas para os protocolos de congelação rápida e vitrificação foram mantidas em vapor de nitrogênio líquido (0,8cm sobre o líquido) por 2 minutos e imersas no nitrogênio líquido. Os embriões foram descongelados por 10 segundos em ar e 20 segundos em banho-maria a 25oC. Os embriões foram reidratados em solução de PBS + 0,2% de BSA + 0,3M de sacarose e em solução de PBS + 0,2% de BSA ambos por 3 minutos.Para avaliar o desenvolvimento, os embriões, após a descongelação, foram co-cultivados com células da granulosa em meio TCM199 ou SOFaa por 4 dias. Os dados foram analisados com o aplicativo PROC MIXED do programa SAS Sistems for Windows®. O grupo controlado apresentou índices de eclosão de 44,65% ± 5,94 e 11,65 ± 3,37 para o meio TCM199 e para o meio SOFaa, respectivamente. Embriões do grupo rápido não apresentaram ) eclosão, independente do meio de cultivo. O grupo vitrificação apresentou índices de eclosão de 9,43% ± 6,77 e 8,67% ± 4,47, respectivamente, em meio TCM199 e SOFaa. Os valores foram significativos quando p<0,05. O grupo controlado apresentou diferença em relação aos outros grupos em ambos os meios de cultivo. No meio TCM199 os índices de re-expansão e eclosão foram mais altos. Para a análise da expressão gênica, 2 pools de 10 blastocistos expandidos de embriões frescos e criopreservados (congelação controlada) foram utilizados para a extração de RNA. Foi feita reação de Transcrição Reversa (RT-PCR) e de PCR em Tempo Real. Os resultados da reação de PCR em Tempo Real demonstraram que a quantidade de material não foi suficiente para a amplificação de produtos em todas as reações. Concluindo, o meio de cultivo TCM199 exerce influência sobre o desenvolvimento embrionário após a criopreservação, sendo mais apropriado do que o meio SOFaa. E, para proceder a análise da expressão gênica pela reação de PCR em Tempo Real é necessário número maior deblastocistos expandidos.
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 07.03.2008
  • Acesso online ao documento

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    FMVZ11300031480T.1954 FMVZ
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    • ABNT

      NICACIO, Alessandra Corallo; VISINTIN, José Antonio. Avaliação do desenvolvimento após a criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro. 2008.Universidade de São Paulo, São Paulo, 2008. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-09042008-112159/ >.
    • APA

      Nicacio, A. C., & Visintin, J. A. (2008). Avaliação do desenvolvimento após a criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro. Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-09042008-112159/
    • NLM

      Nicacio AC, Visintin JA. Avaliação do desenvolvimento após a criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro [Internet]. 2008 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-09042008-112159/
    • Vancouver

      Nicacio AC, Visintin JA. Avaliação do desenvolvimento após a criopreservação de embriões bovinos produzidos in vitro [Internet]. 2008 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/10/10131/tde-09042008-112159/

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