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Estudos cristalográficos da enzima diidroorotato desidrogenase de Trypanosoma cruzi (2008)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: PINHEIRO, MATHEUS PINTO - FCFRP
  • USP Schools: FCFRP
  • Sigla do Departamento: S/D
  • Subjects: TRYPANOSOMA CRUZI; EXPRESSÃO GÊNICA; FÁRMACOS (DESENVOLVIMENTO)
  • Language: Português
  • Abstract: Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da doença de Chagas, esta considerada um problema de saúde pública na América Latina. Cerca de 10 a 14 milhões de pessoas estão infectadas com o Trypanosoma cruzi e 40-120 milhões de pessoas correm o risco de contrair a doença. Diidroorotato desidrogenase (DHODH) é uma flavoenzima que catalisa a oxidação de L-diidroorotato em orotato, a quarta e única reação redox na biossíntese de novo de nucleotídeos de pirimidinas. Atualmente, existe um grande interesse em inibidores da DHODH como agentes terapêuticos para o tratamento de câncer, artrite reumatóide e doenças parasitárias. Em particular, estudos genéticos têm mostrado que DHODH é essencial para a sobrevivência do T. cruzi, validando a idéia de que DHODH pode ser considerada um alvo atraente para o desenvolvimento de drogas antichagásicas. Neste trabalho, reportamos a estrutura cristalográfica da enzima DHODH de Trypanosoma cruzi cepa Y (TcDHODH), uma cepa parcialmente resistente a drogas e altamente virulenta. O gene de TcDHODH que codifica um polipeptídeo consistindo de 314 aminoácidos foi clonado em pET-28a entre os sítios de restrição BamHI e NotI. A enzima TcDHODH foi expressa como uma proteína solúvel em E. coli BL21 (DE3) através da indução com 1 mM IPTG por 5 h a 25 °C e purificada utilizando cromatografia por afinidade em resina Ni-NTA. A cristalização de TcDHODH foi realizada utilizando o método de difusão de vapor em gotas suspensa e sentadas contra oreservatório contendo 1,5 M sulfato de amônio, 5% 2-propanol em 0,1 M acetato de sódio pH 5 adicionado de 2 mM ditiotreitol (DTT). A coleta de dados foi realizada na linha de luz D03B-MX1 do Laboratório Nacional de Luz Síncrotron (LNLS) com radiação a 1,427 A (angstron). Cristais de TcDHODH difratam à resolução de 2.2 A (angstron) e crescem no grupo espacial P’2 IND. 1’’2 IND. 1’’2 IND. 1’ com parâmetros de cela a = 82.39, b = 123.92 e c = 128.89 A (angstron). A estrutura foi resolvida por técnicas de substituição molecular e refinada a 2.2 A (angstron) de resolução. Uma análise detalhada da enzima TcDHODH cepa Y tem nos permitido identificar características estruturais que podem ser melhor exploradas para o desenho de inibidores altamente específicos através da tecnologia de desenho de drogas baseado em estrutura, como uma importante ferramenta no combate a doença de Chagas
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 29.02.2008
  • Acesso online ao documento

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    BibliotecaCód. de barrasNúm. de chamada
    FCFRP10600009187Pinheiro, Matheus Pinto
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    • ABNT

      PINHEIRO, Matheus Pinto; COSTA, Maria Cristina Nonato. Estudos cristalográficos da enzima diidroorotato desidrogenase de Trypanosoma cruzi. 2008.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2008. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60136/tde-16122010-153549/?&lang=pt-br >.
    • APA

      Pinheiro, M. P., & Costa, M. C. N. (2008). Estudos cristalográficos da enzima diidroorotato desidrogenase de Trypanosoma cruzi. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60136/tde-16122010-153549/?&lang=pt-br
    • NLM

      Pinheiro MP, Costa MCN. Estudos cristalográficos da enzima diidroorotato desidrogenase de Trypanosoma cruzi [Internet]. 2008 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60136/tde-16122010-153549/?&lang=pt-br
    • Vancouver

      Pinheiro MP, Costa MCN. Estudos cristalográficos da enzima diidroorotato desidrogenase de Trypanosoma cruzi [Internet]. 2008 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/60/60136/tde-16122010-153549/?&lang=pt-br

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