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Técnicas de fluorescência no monitoramento de membranas modelo (2008)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: MARQUEZIN, CÁSSIA ALESSANDRA - FFCLRP
  • USP Schools: FFCLRP
  • Subjects: FLUORESCÊNCIA; AMINOÁCIDOS; POLIPEPTÍDEOS; MEMBRANAS CELULARES
  • Language: Português
  • Abstract: Apresentamos os resultados de estudos sobre a utilização de técnicas baseadas no fenômeno de fluorescência para a investigação de processos relacionados a membranas modelo. Nessa investigação, estão envolvidas medidas de propriedades espectrais de absorção e emissão de luz por cromóforos adequados, determinação experimental de perfis de decaimento temporal da fluorescência e correlação temporal de emissão fluorescente, bem como a utilização apropriada de metodologias para análise e interpretação dos dados experimentais. Foram utilizados diversos compostos que apresentam absorção e emissão na região ultravioleta/visível, como as sondas lipo6licas 2-Amino-N-hexadecil-benzamida (Ahba), 6-lauryl-2-dimethylaminonaphthalene (Laurdan), N-(7 -nitrobenz-2-oxa-l,3- diazol-4-yl) (NBD), em diferentes condições: meio aquoso homogêneo, suspensões de micelas de Sodium Dodecyl Sulfate (SDS), Cetyl-trimethyl-ammonium-bromide (CTAB) e 3-(Dodecyl-Oimethyl-Ammonio)-propane-sulfonate (DPS) e vesículas de fosfolipídios, como o 1,2-Dimyristoyl-sn-Glycero-3-Phosphocholine (DMPC, o l,2-Dimyristoyl-sn-Glycero-3-[phospho-rac-(1-glycerol)](Sodium Salt) (DMPG) e o l-Palmitoyl-2-Oleoyl-sn- Glycero-3-Phosphocholine (POPC. Supressores alquilpiridínios de diferentes comprimentos da cadeia alquila e, portanto, diferentes afinidades por agregados anfifílicos, foram utilizados em experimentos de supressão da fluorescência da sonda Ahba. Usando o formalismo que descreve fenômenos desupressão dependente de colisões entre fluoróforo e supressor, observamos que as taxas de supressão são maiores em presença de agregados anfifílicos carregados negativamente: micelas de SDS e vesículas de DMPG; em micelas zwiitteriônicas o processo é mais eficiente quando a hidrofobicidade do supressor é grande, o que ocorre quando a cadeia alquil é mais longa. Realizamos experimentos de transferência de energia por ressonância de Förster (FRET) onde que o grupo ) fluorescente da sonda lipofílica Ahba atuou como doador. Como aceitadores utilizamos os compostos Acridina Laranja, N-(2,4,dinitrofenil)-etilenodiamina (Eddnp) e o NBD ligado a fosfolipídios. Fizemos uso do programa CONTIN para análise de dados experimentais de perfis de decaimento da fluorescência em sistemas em que ocorre transferência de energia e obtivemos distribuições de distâncias para os pares Ahba/Eddnp e Ahba/NBD-fosfolipídios na presença de vesículas de fosfolipídios. Para este último par, verificou-se que a distribuição de distâncias depende da temperatura do sistema, ou seja, da fase da bicamada, da concentração de aceitador e da posição onde o NBD está ligado ao fosfolipídio. Analisamos a utilização da sonda Laurdan em presença de vesículas de DMPC e POPC, em experimentos de espectroscopia de correlação de fluorescência. Embora tenha apresentado sinal elevado de fluorescência, a sonda é fotodegradável. Os mesmos experimentos de correlação de fluorescência foram realizados com o Ahba que, apesarde ter se mostrado bastante fotoestável, revelou não ser uma sonda adequada para uso em tal técnica. O espectro de excitação a dois fótons foi obtido para esta sonda, com máximo de absorção em 695 nm. Em experimentos de microscopia de fluorescência, o Ahba mostrou ser um bom marcador fluorescente para membranas lipídicas, ao possibilitar a aquisição de imagens de fluorescência de vesículas gigantes marcadas
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 05.12.2008
  • Acesso online ao documento

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    BibliotecaCód. de barrasNúm. de chamada
    FCLRP20800029678Marquezin, Cssia Alessandra
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    • ABNT

      MARQUEZIN, Cássia Alessandra; ITO, Amando S. Técnicas de fluorescência no monitoramento de membranas modelo. 2008.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2008. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59135/tde-26032009-154339/ >.
    • APA

      Marquezin, C. A., & Ito, A. S. (2008). Técnicas de fluorescência no monitoramento de membranas modelo. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59135/tde-26032009-154339/
    • NLM

      Marquezin CA, Ito AS. Técnicas de fluorescência no monitoramento de membranas modelo [Internet]. 2008 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59135/tde-26032009-154339/
    • Vancouver

      Marquezin CA, Ito AS. Técnicas de fluorescência no monitoramento de membranas modelo [Internet]. 2008 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/59/59135/tde-26032009-154339/

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