Construção de linhagens de levedura adequadas para produção de Scp e para serem empregadas em sistemas de biocontenção de OGMs (2008)
- Authors:
- USP affiliated authors: VICENTE, ELISABETE JOSE - ICB ; SCHENBERG, ANA CLARA GUERRINI - ICB
- Unidade: ICB
- Assunto: MICROBIOLOGIA
- Language: Inglês
- Abstract: O objetivo deste trabalho foi a obtenção de uma linhagem de levedura Saccharomyces cerevisiae que apresente teores reduzidos de ácidos nucléicos e que, por outro lado, mantenha intactas as propriedades como SCP ("single cell protein"). Para tanto, em trabalhos anterios realizados em nosso grupo, o gene da nuclease de Serratia marcescens (nucA) havia sido clonado sob o controle do promotor híbrido ADH2/GAPDH (BALAN & SCHENBERG, 2005). Esta fusão gênica havia sido clonada em plasmídeo de múltiplas cópias por célula e num vetor integrativo (1 cópia/célula). Assim, os transformantes obtidos não expressavam o gene nucA durante a fase de crescimento em meio contendo glicose, e esta expressão somente é ativada ao término do cultivo, após esgotamento da glicose do meio, provocando a degradação do material genético celular. Neste trabalho, a fusão gênica "ADH2/GAPDH-nucA" foi clonada em vetor que permite a -integração em múltiplas cópias estáveis por célula e a transformação genéticad de linhagens de levedura mutantes auxotroficas e selvagens (GUERRA et al, 2006). Linhagens de S. cerevisiae laboratoriais (JSC302, YPH252 e S288C) e empregadas em Usinas sucroalcooleiras (PE-2) foram empregadas como hospedeiras. A seleção de clones transformantes, que apresentam o cassete de expressão integrado no genoma, foi realizada pela seleção daqueles que perdem a viabilidade celular ao se dividir em meio sem glicose, ou seja, que apresentam o fenótipo suicida. A confirmação da integraçãodo fragmento ADH2/GAPDH-nucA no genoma da levedura foi realizada por PCR, e o fenótipo suicida foi confirmado, por micrografias das células submetidas a coloração DAPI. Os clones transformantes apresentam 100% de estabilidade. Observou-se uma correlação entre o maior número de cópias integradas no genoma e aumento da mortalidade celular em condição de ausência de glicose.
- Imprenta:
- Source:
- Título do periódico: Resumos
- Conference titles: Congresso sobre Diversidade Microbiana da Amazônia
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ABNT
RACOWSKI, I. et al. Construção de linhagens de levedura adequadas para produção de Scp e para serem empregadas em sistemas de biocontenção de OGMs. 2008, Anais.. Manaus: Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, 2008. . Acesso em: 18 abr. 2024. -
APA
Racowski, I., Vicente, E. J., Guerra, O. G., & Schenberg, A. C. G. (2008). Construção de linhagens de levedura adequadas para produção de Scp e para serem empregadas em sistemas de biocontenção de OGMs. In Resumos. Manaus: Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo. -
NLM
Racowski I, Vicente EJ, Guerra OG, Schenberg ACG. Construção de linhagens de levedura adequadas para produção de Scp e para serem empregadas em sistemas de biocontenção de OGMs. Resumos. 2008 ;[citado 2024 abr. 18 ] -
Vancouver
Racowski I, Vicente EJ, Guerra OG, Schenberg ACG. Construção de linhagens de levedura adequadas para produção de Scp e para serem empregadas em sistemas de biocontenção de OGMs. Resumos. 2008 ;[citado 2024 abr. 18 ] - Isolation of Trypanosoma cruzi dna fragments which function as ars elements in Saccharomyces cerevisiae
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