Estudo do complexo celulolítico do fungo termófilo Scytalidium thermophilum: produção, caracterização bioquímica e purificação de uma endoglucanase (2009)
- Authors:
- Autor USP: SILVA, JEAN CARLOS RODRIGUES DA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBI
- Subjects: FUNGOS TERMÓFILOS; FUNGOS CELULOLÍTICOS; ENZIMOLOGIA; BIOQUÍMICA MICROBIANA
- Language: Português
- Abstract: A celulose é o mais abundante recurso natural biológico renovável e sua hidrólise é catalisada por celulases. Estas enzimas são classificadas como endoglucanases, exoglucanases e ß-glucosidases, e agem de forma diferente, hidrolisando ligações glicosídicas do tipo ß1?4. Endoglucanases hidrolisam aleatoriamente ligações glicosídicas acessíveis das cadeias de celulose produzindo novas cadeias terminais; as exoglucanases clivam progressivamente cadeias de celulose a partir de suas extremidades, liberando celobiose solúvel; e as ß-glucosidases hidrolisam celobiose à glicose. Celulases são produzidas por um grande número fungos e de bactérias. Estas enzimas são aplicadas em indústrias de detergente, amido, suco de fruta, papel, alimento e cerveja. Celulases podem ser usadas diretamente na preparação dos produtos comerciais ou posteriormente, no tratamento dos resíduos. Nos últimos cinco anos, há um interesse crescente na produção de etanol a partir da biomassa lignocelulósica. O objetivo deste trabalho foi estudar a produção e as propriedades bioquímicas das celulases do fungo termófilo Scytalidium thermophilum. A maior produção de atividade da celulase ocorreu após de 72 h de crescimento, em meio de cultura contendo substratos celulósicos. As condições ótimas aparentes para atividades da celulase foram determinadas no filtrado bruto. As condições ótimas de pH e temperatura foram 4,0, 6,0, 5,0 e 55°C, 60°C e 55°C, para atividades de CMCase,avicelase e FPase, respectivamente. Interessantemente, as celulases de Scytalidium no filtrado bruto não exibiram significativa inibição na presença de glicose e celobiose no meio reacional. Na tentativa de purificação das celulases, foi utilizado um procedimento envolvendo a precipitação por sulfato do amônio e cromatografia em CM-Fractogel. Uma endoglucanase (CMcase) foi purificada por este procedimento, como indicado por análises de PAGE e SDS-PAGE. A enzima foi purificada 13,76 vezes, a preparação final exibiu uma atividade específica de 76,38 U/mg de proteína e um rendimento de 16%. As massas moleculares aparentes determinadas por SDS-PAGE e por filtração em gel foram 47 kDa e 44 kDa, respectivamente. As condições ótimas aparentes de pH e temperatura foram 4,5 e 60°C, respectivamente. A enzima purificada hidrolisou eficientemente CMC e exibiu a pouca especificidade para avicel, papel de filtro, o amido e celobiose. Os íons mercúrio, cobre e alumínio inibiram a CMCase purificada, enquanto que o ß-mercaptoetanol e o cobalto estimularam a enzima. As meias-vidas da enzima quando incubada a 60°C em meio aquoso ou a 70 °C em meio contendo 1 % de CMC foram de 23 minutos e 46 minutos, respectivamente. A enzima exibiu 'K IND.m' e 'V IND.máx' para o CMC de 0,8% (p/v) e 122,5 U/mg de proteína, respectivamente. Os resultados encontrados sugerem que a endoglucanase de Scytalidium estudada tem potencial para aplicações biotecnológicas em processos desacarificação
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2009
- Data da defesa: 02.03.2009
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ABNT
SILVA, Jean Carlos Rodrigues da. Estudo do complexo celulolítico do fungo termófilo Scytalidium thermophilum: produção, caracterização bioquímica e purificação de uma endoglucanase. 2009. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2009. . Acesso em: 26 abr. 2024. -
APA
Silva, J. C. R. da. (2009). Estudo do complexo celulolítico do fungo termófilo Scytalidium thermophilum: produção, caracterização bioquímica e purificação de uma endoglucanase (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Silva JCR da. Estudo do complexo celulolítico do fungo termófilo Scytalidium thermophilum: produção, caracterização bioquímica e purificação de uma endoglucanase. 2009 ;[citado 2024 abr. 26 ] -
Vancouver
Silva JCR da. Estudo do complexo celulolítico do fungo termófilo Scytalidium thermophilum: produção, caracterização bioquímica e purificação de uma endoglucanase. 2009 ;[citado 2024 abr. 26 ]
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