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Estudo das interações da Septina 4 humana (2009)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: SILVA, NAYARA CAVALCANTE - IFSC
  • USP Schools: IFSC
  • Sigla do Departamento: FFI
  • Subjects: PROTEÍNAS (HUMANO); BIOQUÍMICA (ESTUDO;ESTRUTURA)
  • Language: Português
  • Abstract: Septinas são proteínas ligantes a GTP encontradas desde fungos até metazoários. A primeira função identificada para septinas foi o seu papel central na organização e dinâmica do septo de divisão de leveduras. Uma das características marcantes é que septinas se organizam em heterofilamentos de 7 a 9 nm de espessura que foram purificados de diversos organismos tais como Saccharomyces cerevisiae, Drosophila e cérebro de camundongos. Hoje se sabe que septinas não estão envolvidas apenas nos processos de divisão celular, mas em uma variedade de processos como tráfico de vesículas, exocitose, interação com proteínas do citoesqueleto e com a membrana plasmática, o que resulta em alterações da morfologia celular. Neste trabalho foram desenvolvidos estudos da septina 4 humana (SEPT4) nos quais foi realizado a expressão e purificação da SEPT 4 pelo uso do sistema de expressão heteróloga em E. colí e em células de insetos (Sf-9) via baculovírus. A tentativa de expressão usando o vetor pETTEV em E.colí não obteve sucesso, pois a proteína não foi expressa na forma solúvel. A construção do baculovírus recombinante AcSept4 e expressão da SEPT4 nas células de insetos foi realizada com êxito, mas o processo de purificação não foi satisfatório. Com o intuito de obter informações sobre possíveis proteínas que interagem com a SEPT4 e conseqüentemente sobre as funções desempenhadas por ela na célula, a SEPT4 foi utilizada como isca para ensaios de interação proteína-proteína pelatécnica de duplo híbrido. Para isso, o gene da SEPT4 foi clonado fusionado ao domínio de ligação ao DNA Lex-A. A realização do ensaio de duplo híbrido com a proteína completa não foi possível, pois a mesma provocou a auto ativação do sistema, por isso uma nova construção foi realizada com a região GTPase e C-terminal SEPT4GC (124-478) como isca.Dentre as interações identificadas, foram encontradas apenas septinas do grupo II(SEPT6, SEPT8, SEPTIO e SEPT11) ) e quatro novas interações, que ainda precisam ser confirmadas. Por outro lado, uma interação já descrita na literatura envolve a proteína a-sinucleína, que é uma proteína abundantemente expressa no cérebro e associada à doença de Parkinson. O foco do estudo dessa interação foi realizar ensaios com os diferentes domínios da SEPT 4 para comprovar uma interação direta e com isso tentar mapear o sítio de interação com a 'ALFA' -sinucleína. Os resultados obtidos pela ressonância plàsmônica de superfície (SPR) indicam que o domínio C-terminal participa da interação com baixa afinidade ('K IND.D' =390 'UM'lM) e sugerem que o domínio GTPase também pode estar envolvido. Já os dados obtidos com os experimentos de RMN e anisotropia de t1uorescência mostram indícios que a interação é dependente da conformação da a-sinucleína por que a interação aconteceria com maior afinidade quando a a-sinucleína está na presença de SDS
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 09.09.2009
  • Acesso online ao documento

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    • ABNT

      SILVA, Nayara Cavalcante; GARRATT, Richard Charles. Estudo das interações da Septina 4 humana. 2009.Universidade de São Paulo, São Carlos, 2009. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-16092009-150319/ >.
    • APA

      Silva, N. C., & Garratt, R. C. (2009). Estudo das interações da Septina 4 humana. Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-16092009-150319/
    • NLM

      Silva NC, Garratt RC. Estudo das interações da Septina 4 humana [Internet]. 2009 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-16092009-150319/
    • Vancouver

      Silva NC, Garratt RC. Estudo das interações da Septina 4 humana [Internet]. 2009 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-16092009-150319/

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