Tese

Caracterização funcional de novos genes com marcante expressão diferencial na progressão do melanoma detectada por microarranjo de cDNA ORESTES (2010)

• Authors:
  • Peronni, Kamila Chagas
  • Espreafico, Enilza Maria (Orientador)
• Autor USP: PERONNI, KAMILA CHAGAS - FMRP
• Unidade: FMRP
• Sigla do Departamento: RBP
• Subjects: MELANOMA; NEOPLASIAS; EXPRESSÃO GÊNICA; BIOLOGIA CELULAR
• Language: Português
• Abstract: No intuito de encontrarmos novos genes envolvidos na progressão tumoral do melanoma, em estudo prévio, confeccionamos um microarranjo de cDNA ORESTES representando 1207 genes (a maioria sem caracterização funcional), o qual foi empregado no estudo da expressão comparativa entre duas linhagens celulares pareadas de melanoma, com diferenças fenotípicas marcantes, sendo uma derivada de tumor primário em fase de progressão vertical (WM278) e a outra de metástase (WM1617). A análise apontou 5 genes superexpressos e 75 subexpressos na linhagem metastática, das quais selecionamos um grupo para uma análise mais aprofundada por RT-PCR em tempo real e para caracterização funcional. CD63 e LRPAP1 mostraram-se superexpressos, 2 e 3 vezes, respectivamente, na linhagem metastática em relação à linhagem em fase de progressão vertical. No entanto, em comparação aos melanócitos, CD63 mostrou-se com expressão reduzida nas linhagens de melanoma de ambos os estágios, enquanto LRPAP1 mostrou-se 3 vezes mais expresso na linhagem metastática em relação aos melanócitos. Dentre os genes subexpressos na linhagem metastática CYR61, TMEPAI, BUB3, TMEM106C e HMGN2, observamos níveis de mRNA reduzidos de 300, 120, 7, 6 e 4 vezes, respectivamente, em WM1617 vs WM278. Em um painel de amostras de nevo e melanoma (incluindo tumores primários e metástase), os genes TMEM106C, BUB3, CYR61 e TMEPAI apresentaram níveis de expressão altamente variável, mas superior em tumores primários. Uma vez que estes genes possuem ilhas CPG em seus promotores, analisamos a influência epigenética na repressão dos genes em estudo. Observamos um efeito ativador da droga inibidora de metilação (5-aza-2'-deoxycytidine) sobre a expressão dos genes CYR61 (8 vezes) e TMEPAI (14 vezes). Análise da localização celular das proteínas em fusão com EGFP em células transfectadas revelou que, durante a intérfase, as proteínasEGFP-HMGN2 e EGFP BUB3 localizam-se no núcleo, CYR61-EGFP co-localiza com o marcador do aparelho de golgi e núcleo, e TMEM106C-EGFP co-localiza com o marcador do retículo endoplasmático. A superexpressão de TMEM106C, BUB3 e CYR61 na linhagem de melanoma metastática WM1617 causou diminuição da viabilidade celular, enquanto HMGN2 não apresentou nenhum efeito. Utilizando um vetor lentiviral e obtendo alta eficiência de transdução observamos que BUB3 causa redução na viabilidade celular na linhagem de melanoma mestastática WMl617, mas não causa qualquer alteração na viabilidade de WM278 e melanócitos. Nossos dados experimentais nos motivam a ampliar a caracterização destes genes como marcadores de prognóstico clínico e como ferramentas moleculares para terapias do melanoma
• Imprenta:
  • Publisher place: Ribeirão Preto
  • Date published: 2010
• Data da defesa: 14.05.2010

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How to cite

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• ABNT

  PERONNI, Kamila Chagas. Caracterização funcional de novos genes com marcante expressão diferencial na progressão do melanoma detectada por microarranjo de cDNA ORESTES. 2010. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2010. . Acesso em: 19 abr. 2024.

• APA

  Peronni, K. C. (2010). Caracterização funcional de novos genes com marcante expressão diferencial na progressão do melanoma detectada por microarranjo de cDNA ORESTES (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

• NLM

  Peronni KC. Caracterização funcional de novos genes com marcante expressão diferencial na progressão do melanoma detectada por microarranjo de cDNA ORESTES. 2010 ;[citado 2024 abr. 19 ]

• Vancouver

  Peronni KC. Caracterização funcional de novos genes com marcante expressão diferencial na progressão do melanoma detectada por microarranjo de cDNA ORESTES. 2010 ;[citado 2024 abr. 19 ]

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