Ação da cloroquina sobre a replicação do vírus dengue-2 em células de linhagem monocíticas e em macacos Aotus (2010)
- Authors:
- Autor USP: FARIAS, KLEBER JUVENAL SILVA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RBI
- Subjects: VÍRUS DA DENGUE; REAÇÃO EM CADEIA POR POLIMERASE; MACACOS (EXPERIMENTAÇÃO); CITOMETRIA DE FLUXO; CITOCINAS
- Language: Português
- Abstract: Os vírus dengue pertencem a família Flaviviridae, possuem um genoma RNA de polaridade positiva, fita simples, e e transmitido pelos mosquitos Aedes aegypti e Aedes albopictus. Representam os mais importantes arbovirus causadores de doença em humanos, resultando em progressivas manifestações clinicas tais como febre da dengue, febre hemorrágica da dengue e síndrome do choque da dengue. O controle desta virose e feito apenas pelo controle do vetor, pois não existe ate o momento, nenhuma vacina que proteja os indivíduos desta virose e nenhum antiviral para o controle da replicação viral. Este trabalho tem como objetivo estudar o efeito da cloroquina sobre a replicação do vírus dengue-2 (New Guinea C) em cultura de células de linhagem monocitica (U937) e em primatas do novo mundo do gênero Aotus. Para atingir tais objetivos utilizou-se camundongos Swiss recém-nascidos de 1 a 2 dias de idade para a amplificação do vírus dengue-2 no cérebro destes animais e o cultivo de células C6/36, sendo que as monocamadas confluentes destas células foram infectadas com vírus dengue-2, a uma multiplicidade de infecção (MOI) de 0,1 pfu por célula. A confirmação da infecção viral do macerado de cérebro de camundongos Swiss recém-nascidos e da cultura celular, foi realizado diretamente por meio de uma RT-PCR e indiretamente por imunofluorescência indireta, respectivamente. A avaliação da inibição da replicação viral pela cloroquina (aumenta o pH endossomal) foi realizada em células U937 tratadas 1 hora apos a infecção viral e em intervalos de 2424 e 12-12 horas. Sobrenadantes das células infectadas foram coletados apos períodos de 24, 48, 72, 96, 120, 144 e 168 horas da infecção viral. Foi realizada a extração do RNA total do sobrenadante através do Kit ‘QIAamp POT. ®’ RNA Viral (‘QIAGEN POT. ®’, USA). A replicacao viral foi analisada atraves da quantificacao dos virus produzidos pela deteccao do numero de copias deRNA do vírus dengue-2 e por imunofluorescência indireta . A quantificação foi realizada por PC R em tempo real e por ensaio de placa (PFU). Para verificar a ação da droga in vivo no sentido de investigar o seu possível uso em humanos, grupos de 20 primatas Aotus azarai infulatus foram desafiados por via subcutânea com uma cepa virulenta do vírus dengue-2, e tratados ou não 2 dias apos a infecção com a cloroquina por via oral, sendo que a droga foi administrada em intervalos de 24 horas durante dez dias. Os animais foram observados durante 30 dias. Foram investigados parâmetros clínicos tais como, febre e alteração do comportamento. A viremia foi analisada por RT-PCR e a dosagem das citocinas inflamatórias (IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, TNF-‘alfa’ e IFN-‘gama’) foi realizada por Cytometric Bead Array (CBA) utilizando o kit de citocinas Thl/Th2 de primatas não-humanos (BD), e a analise do monitoramento dos níveis séricos das aminotransferases: Alanina aminotransferase (ALT) e Aspartato aminotransferase (AST) realizados por métodos convencionais. Este estudo fornece subsídios para que possamos, em um próximo estudo, investigar o uso da cloroquina em seres humanos infectados pelos vírus dengue
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2010
- Data da defesa: 11.08.2010
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ABNT
FARIAS, Kleber Juvenal Silva. Ação da cloroquina sobre a replicação do vírus dengue-2 em células de linhagem monocíticas e em macacos Aotus. 2010. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2010. . Acesso em: 20 abr. 2024. -
APA
Farias, K. J. S. (2010). Ação da cloroquina sobre a replicação do vírus dengue-2 em células de linhagem monocíticas e em macacos Aotus (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Farias KJS. Ação da cloroquina sobre a replicação do vírus dengue-2 em células de linhagem monocíticas e em macacos Aotus. 2010 ;[citado 2024 abr. 20 ] -
Vancouver
Farias KJS. Ação da cloroquina sobre a replicação do vírus dengue-2 em células de linhagem monocíticas e em macacos Aotus. 2010 ;[citado 2024 abr. 20 ]
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