Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) atípica sorotipo O55:H7: descrição da antifagocitose a partir de um fator secretado (2011)
- Authors:
- Autor USP: MELO, KEYDE CRISTINA MARTINS DE - BIOTECNOLOGIA
- Unidade: BIOTECNOLOGIA
- Subjects: ESCHERICHIA COLI; FAGOCITOSE; MACRÓFAGOS; INFECÇÕES POR ENTEROBACTERIACEAE; INFECÇÕES BACTERIANAS GRAM-NEGATIVAS
- Language: Português
- Abstract: Escherichia coli enteropatogênica atípica (EPECa) é uma bactéria extracelular responsável por causar diarréia em crianças e adultos que apresenta alta heterogeneidade quanto aos fatores de virulência. O aumento dos casos de diarréia causados por EPECa evoca a capacidade de adaptação e patogenicidade desta subcategoria, que atualmente é considerada um patógeno emergente. O objetivo aqui foi estudar o comportamento de EPECa na interação com fagócitos profissionais afim de esclarecer os mecanismos que lhe conferem tamanhas adaptabilidade e patogenicidade. Macrófagos de cultura primária, derivados de medula óssea de C57/BL6 ou de linhagem C57/BL6 foram infectados com diversas amostras bacterianas. A amostra 7 (O55:H7) foi a única a apresentar menor interação com os macrófagos. Na detecção das bactérias fagocitadas, através da determinação da UFC/mL, a amostra 7 foi menos fagocitada nos diferentes pulsos de infecção (10, 30 e 60 min). A pré-incubação de macrófagos com o sobrenadante da amostra 7 reduziu a fagocitose de uma amostra controle, sugerindo que o fator responsável pelo efeito antifagocítico estava presente no sobrenadante. O sobrenadante de cultivo da amostra 7, crescida em meio TSB, foi submetido ao fracionamento por SPE e HPLC e a fração que manteve o efeito antifagocítico (25% ACN - 7) mostrou-se capaz de: i) inibir 100% a fagocitose de bactérias; ii) reduzir a fagocitose de Saccharomyces cerevisiae e iii) reduzir a adesão da EPEC típica E234869 às células HEp-2 e Caco-2. Resultados semelhantes foram obtidos com a fração 25% ACN obtida da EPECa 320 (O55:H7).Os perfis cromatográficos das frações 25% ACN – 7 e 320 originários do meio TSB mostraram-se extremamente complexos, impossibilitando a identificação do fator responsável pelo efeito antifagocítico. No fracionamento do sobrenadante da amostra 7, crescida em meio mínimo, também foi identificado uma fração com capacidade de reduzir a fagocitose. Como esperado, o perfil cromatográfico desta fração mostrou-se mais simples, já que este meio é composto apenas de sais e glicose. Assim, a partir deste meio será mais fácil purificar e identificar o fator antifagocítico. Conseguimos com este trabalho encontrar um mecanismo que, embora talvez não sozinho, provavelmente exerce papel importante na adaptabilidade e patogenicidade das EPECa. Ainda, iniciamos a caracterização de um fator antifagocítico secretado por EPECa (O55:H7) e que é solúvel em meio aquoso, é termoestável, é uma molécula pequena, menor que 2kDa, não é microbicida ou citotóxico e, por último, há indicativos de que possa apresentar uma região glicosídica. Resta agora continuar o trabalho de purificação e caracterização a fim de identificar o fator antifagocítico.
- Imprenta:
- Data da defesa: 02.02.2011
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ABNT
MELO, Keyde Cristina Martins de. Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) atípica sorotipo O55:H7: descrição da antifagocitose a partir de um fator secretado. 2011. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2011. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-24032011-091904/. Acesso em: 19 abr. 2024. -
APA
Melo, K. C. M. de. (2011). Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) atípica sorotipo O55:H7: descrição da antifagocitose a partir de um fator secretado (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-24032011-091904/ -
NLM
Melo KCM de. Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) atípica sorotipo O55:H7: descrição da antifagocitose a partir de um fator secretado [Internet]. 2011 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-24032011-091904/ -
Vancouver
Melo KCM de. Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) atípica sorotipo O55:H7: descrição da antifagocitose a partir de um fator secretado [Internet]. 2011 ;[citado 2024 abr. 19 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/87/87131/tde-24032011-091904/
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