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Estudos da dinâmica estrutural da proteína ligante de cálcio S100A12 humana e da lisozima T4 (2011)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: CITADINI, ANA PAULA DA SILVA - IFSC
  • USP Schools: IFSC
  • Sigla do Departamento: FCM
  • Subjects: RESSONÂNCIA PARAMAGNÉTICA ELETRÔNICA; LISOZIMAS; PROTEÍNAS DE LIGAÇÃO DO CÁLCIO; PROTEÍNAS; SPIN
  • Language: Português
  • Abstract: O trabalho ora apresentado foi concebido como tendo dois objetivos. O primeiro, mais geral, foi implementar uma nova metodologia para o estudo de mudanças conformacionais em proteínas, ou seja, de sua dinâmica estrutural. A técnica de marcação de spin sítio dirigida aliada à  ressonância paramagnética eletrônica (SDSL-RPE) são os pilares desse novo método que faz, agora, parte do conjunto de técnicas disponíveis no Grupo de Biofísica Molecular Sérgio Mascarenhas do Instituto de Física de São Carlos (USP). O segundo objetivo, mais específico, representou o caminho efetivamente tomado para que se alcançasse o objetivo geral. Para isso, foi proposto o estudo da correlação estrutura e função de dois sistemas biológicos muito interessantes. O primeiro deles envolveu o estudo do movimento das hélices que compõem estrutura da proteína ligante de cállcio S100A12 humana (HS100A12) induzido pelos íons cálcio e zinco. Sabendo que a proteção S100A12 humana além de ligar íons Ca+2, apresenta afinidade por outros metais divalentes, como os íoons Zn+2 e Cu+2, e que a formação de diferentes oligômeros da proteína é governada pela concentração dos íons Ca+2 e Zn+2, realizamos estudos espectroscópicos utilizando a técnica de dicroísmo circular a fim de investigarmos a estabilidade térmica da proteína HS100A12 na presença e ausência dos íons cálcio e zinco. Mudanças conformacionais na estrutura da HS100A12 foram monitoradas através da construção de uma série de mutantes (simples e duplos) em que resíduos na hélices B, C e D foram trocados por cisteínas, subsequentemente marcadas com a sonda magnética MTSSL e submetidas às análises de SDSL-RPE. Estas consistiram na medida do espectro de RPE dos vários mutantes em temperatura ambiente para estudarmos os efeitos da presença dos íons sobre a dinâmica experimentada pela sonda nas diversas posições. Além disso, efetuamos medidas de distância entre duassondas seletivamente inseridas na estrutura protéica, procurando assim complementar o entendimento acerca do efeito da presença dos íons sobre a proteína. Por fim, devido ao fato da proteína HS100A12 estar envolvida em alguns eventos de sinalização celular e interação com o receptor para produtos de glicosilação (RAGE), decidimos também, estudar a interação da proteína com modelos de biomembranas, utilizando monocamadas de Langmuir. O outro problema de interesse utilizou a lizosima do fago T4, uma proteína padrão, da qual uma variedade de mutantes é produzida rotineiramente a fim de obtermos mais detalhes a respeito da sua correlação estrutura e função e tornar mais sólido o entendimento da técnica SDSL. Inicialmente, realizamos um estudo com a suposta criaçãoo de uma cavidade no "core" hidrofóbico da porção C-terminal da enzima, quando mutamos a Leu 133 por Ala e/ou Gly, ou seja, quando trocamos um resíduo grande por um de menor volume, pois se acredita que a proteção sofra um reajuste estrutural com o intuito de preencher o espaço vazio criado por essa substituição. Para isso, propusemos estudar por SDSL o movimento da 'ALFA'-hélice H inserindo o marcador de spin na posição vizinha ao resíduo mutado. Adicionalmente, realizamos um experimento de "transmutação" com a enzima T4L, a fim de investigar a natureza das contribuições para os diferentes modos dinâmicos experimentados pelo marcador de spin quando introduzido em sítios topologicamente semelhantes
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 28.04.2011
  • Acesso online ao documento

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    IFSC82002127Te2127
    How to cite
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    • ABNT

      CITADINI, Ana Paula da Silva; COSTA FILHO, Antônio José da; COSTA, Maria Cristina Nonato. Estudos da dinâmica estrutural da proteína ligante de cálcio S100A12 humana e da lisozima T4. 2011.Universidade de São Paulo, São Carlos, 2011. Disponível em: < http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-05072011-134514/ >.
    • APA

      Citadini, A. P. da S., Costa Filho, A. J. da, & Costa, M. C. N. (2011). Estudos da dinâmica estrutural da proteína ligante de cálcio S100A12 humana e da lisozima T4. Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-05072011-134514/
    • NLM

      Citadini AP da S, Costa Filho AJ da, Costa MCN. Estudos da dinâmica estrutural da proteína ligante de cálcio S100A12 humana e da lisozima T4 [Internet]. 2011 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-05072011-134514/
    • Vancouver

      Citadini AP da S, Costa Filho AJ da, Costa MCN. Estudos da dinâmica estrutural da proteína ligante de cálcio S100A12 humana e da lisozima T4 [Internet]. 2011 ;Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76132/tde-05072011-134514/

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