Avaliação da atividade biológica in vivo da molécula de fator VIII recombinante FVIIIDBr & geração e caracterização de um modelo murino de hemofilia A imunodeficiente (2011)
- Authors:
- Autor USP: ROSA, NATHÁLIA GONSALES DA - FMRP
- Unidade: FMRP
- Sigla do Departamento: RCM
- Subjects: HEMOFILIA; FATOR VIII; LINHAGEM CELULAR
- Language: Português
- Abstract: A hemofilia A é uma desordem sanguínea causado pela produção deficiente ou ausente de fator VIII (FVIII). Nesse trabalho foi utilizada a molécula humana de FVIII recombinante (FVIIIr) com domínio B delatado, denominada FVIIIDBr, produzida pela linhagem celular humana Sk-Hep-FVIIIDB. A molécula FVIIIDBr foi caracterizada in vitro quanto ao seu perfil de produção e o cultivo com soro foi em média 1,85 vezes maior em relação ao livre de soro. O cultivo livre de soro foi escolhido por ser mais adequado para a realização das etapas seguintes. No processamento in vitro a molécula FVIIIDBr foi caracterizada após congelamento, concentração e liofilização e manteve cerca de 50% da atividade biológica original. Um lote de sobrenadante contendo FVIIIDBr liofilizado foi utilizado nos ensaios in vivo aprovados pelo Comitê de Ética em Experimentação Animai (CETEA) com protocolo n° 082/2008. O perfil de atividade biológica em camundongos com hemofilia A (Hemo A) mostrou que a molécula de FVIIIDBr obteve valores absolutos maiores que o FVIII derivado do plasma (FVIIIdp) nos tempos de 2, 3 e 6 horas após a infusão, além disso, nos camundongos tratados com FVIIIdp não foi detectado FVIII ativo a partir de 3 horas da infusão, o que indica também uma maior estabilidade do FVIIIr. Na avaliação do potencial hemostático, a molécula FVIIIDBr foi capaz de corrigir o sangramento provocado pela transacção total da cauda de camundongos Hemo A, enquanto que os animais do grupo controle morreram em até 28 horas após a lesão. O piloto de purificação do FVIIIDBr mostrou um enriquecimento na atividade especifica de 55 vezes em relação ao sobrenadante. A segunda proposta desse trabalho foi gerar e caracterizar uma linhagem de camundongos com hemofilia A e imunodeficiência severa combinada (SCID), denominados de Hemo A/SCID, para o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas para a hemofilia A. Os procedimentos foramaprovados pelo CETEA com o protocolo n° 075/2010. Os camundongos Hemo A/SCID foram obtidas a partir da geração parental composta por fêmea Hemo A e macho SCID. Os acasalamentos seguintes foram selecionados pelo genótipo dos animais e padrão de herança das mutações ‘F8 POT. tm1Kaz’ (ligada ao sexo) e ‘Prkdc POT. scid’ (autossômico recessivo). Na geração F4 todos os animais possuiam as mutações ‘F8 POT. tm1Kaz’e ‘Prkdc POT. scid’. A caracterização fenotípica da hemofilia A mostrou a ausência de FVIII ativo no plasma de camundongos Hemo A e Hemo A/SCID. Na caracterização fenotípica para SCID, os níveis de linfócitos B e T, na medula óssea e no baço, foram reduzidos e si mi lares entre camundongos SC I D e Hemo A/SCI D. A caracterização funcional do modelo Hemo A/SCID foi realizada pelo perfil de atividade biológica do FVIIIdp que apresentou desempenho similar ao modelo Hemo A convencional
- Imprenta:
- Publisher place: Ribeirão Preto
- Date published: 2011
- Data da defesa: 25.03.2011
-
ABNT
ROSA, Nathalia Gonsales da. Avaliação da atividade biológica in vivo da molécula de fator VIII recombinante FVIIIDBr & geração e caracterização de um modelo murino de hemofilia A imunodeficiente. 2011. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2011. . Acesso em: 29 mar. 2024. -
APA
Rosa, N. G. da. (2011). Avaliação da atividade biológica in vivo da molécula de fator VIII recombinante FVIIIDBr & geração e caracterização de um modelo murino de hemofilia A imunodeficiente (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto. -
NLM
Rosa NG da. Avaliação da atividade biológica in vivo da molécula de fator VIII recombinante FVIIIDBr & geração e caracterização de um modelo murino de hemofilia A imunodeficiente. 2011 ;[citado 2024 mar. 29 ] -
Vancouver
Rosa NG da. Avaliação da atividade biológica in vivo da molécula de fator VIII recombinante FVIIIDBr & geração e caracterização de um modelo murino de hemofilia A imunodeficiente. 2011 ;[citado 2024 mar. 29 ] - Avaliação da atividade biológica in vivo da molécula de fator VIII recombinante FVIIIDBr & geração e caracterização de um modelo murino de hemofilia A imunodeficiente
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