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Caracterização funcional do fator de transcrição PacC do dermatófito Trichophyton rubrum: regulação da expressão gênica em resposta ao pH ambiente e na interação com moléculas do hospedeiro (2011)

  • Authors:
  • USP affiliated authors: CAZZANIGA, RODRIGO ANSELMO - FMRP
  • USP Schools: FMRP
  • Subjects: ARTHRODERMATACEAE; REGULAÇÃO GÊNICA; EXPRESSÃO GÊNICA
  • Language: Português
  • Abstract: Os dermatófitos são patógenos que se desenvolvem em substratos queratinizados, causando dermatofitoses ou tineas. A infecção se deve, entre outros fatores, à capacidade dos conídios aderirem e invadirem o tecido hospedeiro, utilizando os nutrientes presentes neste ambiente, os quais são degradados pela ação de enzimas proteolíticas secretadas. A regulação desta maquinaria metabólica é governada pelo sensoriamento do pH ambiente e neste contexto, o fator de transcrição PacC media uma via transdutora de sinal composta pelos produtos dos genes pal, já descrita em fungos. O objetivo deste trabalho foi investigar o papel funcional de PacC na expressão de genes de Trichophyton rubrum envolvidos na degradação de queratina e na resposta adaptativa ao pH ambiente, analisando o perfil de expressão gênica em linhagens selvagem H6 e mutante pacC-1. O cultivo em pH 5,0 e 8,0 por 1 hora, seguido de hibridação subtrativo supressivo, permitiu a identificação de genes possivelmente envolvidos no início e na manutenção da infecção. Em pH alcalino, no qual muitas enzimas secretadas pelo fungo têm atividade ótima, foram identificados 164 genes diferencialmente expressos. Os níveis de expressão de alguns destes genes foram avaliados por Northern blot, como: histona H3, Rho-GTPase e aminoácido permease, que estão envolvidos em processos importantes na manutenção do crescimento de T. rubrum em ambiente alcalino. Em seguida, para uma melhor compreensão do papel de PacC neste dermatófito, foram selecionados 1791 clones para avaliar, por microarranjos, o perfil de expressão gênica das linhagens H6 e mutante pacC-1, cultivadas nos tempos de 24, 36, 48 e 60 horas em meio contendo apenas queratina como nutriente, pH inicial 5,0. Os resultados mostraram que a alcalinização do meio de cultivo ocorre normalmente para ambas as linhagens, indicando que PacC não participa deste processo. A comparação do perfil de expressãogênica entre as linhagens H6 e mutante pacC-1 revelou genes diferencialmente expressos em cada um dos tempos, sendo que alguns deles foram validados por PCR em tempo real. Estas análises revelaram que os genes palA e o que codifica uma fosfatase ácida são especialmente requeridos no início do crescimento em queratina, quando o meio está ácido, e são positivamente regulados por PacC, nesta condição. Entretanto, os genes palB e o que codifica uma fosfatase alcalina apresentaram níveis de expressão mais elevados nos estágios mais tardios, em pH alcalino, e não foram modulados por PacC. O fator de transcrição APSES, responsável pela morfogênese em outros fungos, apresentou níveis crescentes de expressão do seu transcrito em T. rubrum, sugerindo sua participação no desenvolvimento deste dermatófito, porém sua regulação não é realizada via PacC. Os genes da calcineurina e calmodulina, importantes componentes de vias de sinalização, apresentaram expressão modulada durante o crescimento em queratina, entretanto, estudos mais aprofundados devem ser realizados para demonstrar seu papel em T. rubrum. Nossos resultados demonstraram ainda que a expressão do gene que codifica para Hsp88 é regulada via PacC, sendo este fato corroborado pela presença da sequência consenso para ligação de PacC na sua região promotora. Os resultados deste trabalho demonstram que o fator de transcrição PacC regula a expressão de um amplo espectro de genes, envolvidos em diferentes processos celulares, cuja expressão em T. rubrum é requerida durante o desenvolvimento deste dermatófito em substratos presentes no tecido hospedeiro e na resposta adaptativa ao pH ambiente
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 08.04.2011

  • Exemplares físicos disponíveis nas Bibliotecas da USP
    BibliotecaCód. de barrasNúm. de chamada
    FMRP11200057338Cazzaniga, Rodrigo Anselmo
    How to cite
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    • ABNT

      CAZZANIGA, Rodrigo Anselmo; ROSSI, Nilce Maria Martinez; ROSSI FILHO, Antonio. Caracterização funcional do fator de transcrição PacC do dermatófito Trichophyton rubrum: regulação da expressão gênica em resposta ao pH ambiente e na interação com moléculas do hospedeiro. 2011.Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2011.
    • APA

      Cazzaniga, R. A., Rossi, N. M. M., & Rossi Filho, A. (2011). Caracterização funcional do fator de transcrição PacC do dermatófito Trichophyton rubrum: regulação da expressão gênica em resposta ao pH ambiente e na interação com moléculas do hospedeiro. Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.
    • NLM

      Cazzaniga RA, Rossi NMM, Rossi Filho A. Caracterização funcional do fator de transcrição PacC do dermatófito Trichophyton rubrum: regulação da expressão gênica em resposta ao pH ambiente e na interação com moléculas do hospedeiro. 2011 ;
    • Vancouver

      Cazzaniga RA, Rossi NMM, Rossi Filho A. Caracterização funcional do fator de transcrição PacC do dermatófito Trichophyton rubrum: regulação da expressão gênica em resposta ao pH ambiente e na interação com moléculas do hospedeiro. 2011 ;

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